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文献和实验80 V)要低于分离胶电泳电压(建议 110-150 V),以达到更好的浓缩效果,使样品进入分离胶时被压缩在同一水平线上。电泳直至溴酚蓝染料前沿下至凝胶末端处停止电泳,电泳时间约 2-3 小时。 电转(湿转法) 1) 电泳结束后取出凝胶,在电泳缓冲液中(冷藏的)漂洗数秒。按“三明治”模式,打开电转印夹,每侧垫上一块专用的转膜液浸泡透的海绵垫,再各放一块转膜液浸透的蛋白转移垫(定性滤纸),将凝胶平放在阴极侧滤纸上,最后将转膜液浸透并事先用甲醇浸泡的 PVDF 膜平放在凝胶上,去除气泡,夹好电
时间:60-90 min 转膜设备: 北京六一 半干转 建议:转膜缓冲液用新鲜配制的,可先配成2倍的母液,转膜液的多少会影响电转的效率,一般将吸水纸润湿即可,不要和膜一起浸泡,这样效果很好。 蛋白来源:人肝癌肿瘤细胞 蛋白名称(可保密):notch 蛋白分子量:60-120 KDa WB用膜类型、孔径:pall NC膜 0.45 um 转膜方式(恒压、恒流):恒流 0.3 A 转膜时间:-20度冰柜120 min 转
没有SDS? zhanghai123 还有1g SDS aileen83 我做western的转膜缓冲液:Tris:3g, Glycine:14.4g,methanol: 200ml. 共1000ml 不知道是否能对你有用 haodanzhang 配制转膜液时,甲醇不宜过早加入。个人认为不用加SDS,因为加入SDS后会有气泡产生。转膜条件我的一般是:300mA, 2h,效果
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