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文献和实验CRISPR-Cas9 全程实操教程:从 gRNA 设计到挑单克隆全程指导
基本原理CRISPR-Cas9 是一种细菌获得性免疫,用于降解入侵的外源 DNA。CRISPR RNA (crRNA) 与转录激活 crRNA (Trans-activating crRNA, tracrRNA) 退火形成的复合物能特异性识别与其互补的基因组序列,引导 Cas9 核酸内切酶在目的片段生成 DNA 双链断裂,如下图所示。通过基因工程手段对 crRNA 和 tracrRNA 进行改造,将其连接在一起得到 sgRNA (single guide RNA)。通过将表达 sgRNA
editing. Nat Biotechnol 30(5):460–465. doi: 10.1038/ nbt.2170 12. Deveau H, Garneau JE, Moineau S (2010) CRISPR/Cas system and its role in phagebacteriainteractions. Annu Rev Microbiol64:475–493. doi: 10.1146/annurev. micro.112408.134123 13
一、试剂准备 1、Cas9 过表达慢病毒载体选择。 货号 名称 CR2001 pLV-Cas9-Puro CR2002 pLV-Cas9-Neo CR2003 pLV-Cas9Nick-Puro CR2004
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