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- 一基
- 上海
- YJ-64091914
- 2025年07月11日
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上海一基实业有限公司
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64091-91-4
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文献和实验构建噬菌体肽库的密码子选择 要建立一定长度的肽库 ，首先就是要人工合成相应长度的核苷酸随机序列，理论上核苷酸序列随机性越大，则肽库的多样性就越丰富。如密码子采用NNN合成方式，理论上可以得到所有可能且完全随机的氨基酸序列。但实际上其中有很多序列因存在着终止子而得不到表达，因此要尽量减少终止子在核苷酸序列中出现的频率。终止子有3个：TAA、TGA和TAG，因此密码子的合成方式一般选择(NNK)n、(NNS)”或(VNN)n(N＝A、G、C或T 4种核苷酸，K
(即6．4X107 )不同组合的肽序列。当用4种核苷酸合成编码6肽(即18个核苷酸)的随机DNA片段时，可以有(4X4X4)6 即为6．9X1010 不同组合的核苷酸序列。 如上所述，采用NNK合成方式，则编码随机6肽库的DNA基因片段为(4X4X2)6 即1．07X109 。由此可见，随机6肽库的库容量能够达到109 以上，就认为是完全库。在这个随机肽库中，可能包含自然界中曾经出现过但已经被淘汰的肽，也可能包含正在存在的肽，甚至可能出现自然界中尚未存在或即将产生或很久以后才会出现的肽
Raf 蛋白 Ras 结合结构域的简并进化库合成以及利用片段互补法快速筛选二氢叶酸还原酶的快速折叠且稳定的克隆
，分别对应多个独立的 β 转角或环、β 链和一个 α 螺旋（我们构建了两个文库，分别对应该区域的 N 端和 C 端），其长度为 4〜8 个残基 [41，42] 。以此为依据，我们构建了 13 个简并进化库，用 NNK ( 其中 N 表示任何核苷酸，K 表示 G 或 T ) 取代野生型蛋白的密码子，这就使得 20 种氨基酸中的任何一种都可以插入到每个可变区。然后，在大肠杆菌中利用 DHFR PCA 筛选这些文库中可以与 ras 结合的成员。除了筛选可以完全在体内进行，该方法最大的优点是得到的文库中
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