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北京百奥莱博科技有限公司
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50bp plus DNA ladder(50~1000bp)多少钱是高品质的核酸电泳和回收产品,由北京百奥莱博供应,用于生化研究,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多50bp plus DNA ladder(50~1000bp)等核酸电泳和回收产品请联系我司咨询订购。
名称:50bp plus DNA ladder(50~1000bp)多少钱
规格:100T(2×250μl)
产地:国产|进口
编号:RFT010
品牌:百奥莱博
本产品是由11条带状双链DNA条带组成的即用型DNA Ladder,适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析。含有1×loading buffer,可根据实验需要,直接取2-5μl电泳,使用方便,电泳图像清晰。11条带包括50,100,150,200,250,300,350,400, 500, 600,1000bp,其中300bp条带约为100ng/5μl,其余条带浓度大约50ng/5μl。
使用方法:
1. 取2-5μl本产品加入到琼脂糖凝胶的加样孔中(每1mm×1mm加样孔加1μl,如果加样孔宽于5mm,可以适当增加上样量)就行电泳。
2. 建议电泳条件:凝胶浓度为2.0-2.5%,凝胶长度6-7cm,电泳电压4-10v/cm,电泳时间45-50分钟。
3. 通过EB染色后紫外灯下观察条带。
注意事项:
1. 琼脂糖的质量对DNA的电泳有很大影响,电泳时请尽量使用质量优等的琼脂糖。
2. 请使用新鲜配制的电泳缓冲液和新鲜配制的琼脂糖凝胶进行电泳,以保证Marker良好的分离效果。
3. 如果凝胶中预先加入EB,电泳结束后紫外灯下观察,200bp以下条带亮度较弱,此问题可以通过凝胶后染的方法解决(即溶胶时不加EB,电泳结束后再进行EB染色)。
储存条件:-20℃,有效期1年。
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·His标签抗体
编号:RFT172
英文名称:Anti-His Mouse Monoclonal Antibody
规格:20μl
小鼠抗6×His单抗克隆IgG抗体推荐用于重组蛋白6×His标签检测,不管6×His位于重组蛋白N端、C端或是内部。
来源:小鼠腹水
免疫原:人工合成6xHis 多肽片段并偶联KLH
纯化方式:Protein A 亲和层析纯化
贮存液:10mM PBS ,50%甘油,pH7.4
推荐应用比例(最优稀释比例依不同实验具体情况而定):
Western Blot————1:3000~1:50000
ELISA-———————1:5000~1:200000
储存条件:-20℃
·高保真平末端pfu DNA聚合酶
编号:RFT101
英文名称:pfu DNA Polymerase
规格:100U(40μl)|5×100U(5×40μl)
本品是嗜热古细菌来源的DNA聚合酶,该酶除具有5’-3’DNA聚合酶活性外,还具有很强的3’-5’外切酶活性,增强了PCR扩增的保真度。与Taq酶相比,pfu聚合酶热稳定性更好,更能忍耐较高的变性温度。Pfu的保真性是Taq DNA聚合酶的10-15倍。延伸速度为0.5kb/分钟。PCR产物3’端不带碱基A,为平滑末端,要通过平滑末端克隆法进行克隆。适用于高保真的DNA片段的扩增、DNA片段的平滑化。
试剂盒组成:
pfu DNA Polymerase(2.5U/μl)-————————40μl
10×pfu PCR buffer(含Mg2+)—————————1ml
活性定义:1单位(U) pfu DNA Polymerase活力定义为在74℃、30分钟内,以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。
贮存液:50 mM Tris-HCl (pH 8.0); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50 mM KCl ; Stabilizers; 50% glycerol
使用方法:
1、按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系:
| 成分 | 20μl反应体系 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
| Template | 0.04-0.2 μg | 0.1-0.5 μg | as you wish |
| Primer 1(10μM) | 0.4μl | 1μl | 0.2μM |
| Primer 2(10μM) | 0.4μl | 1μl | 0.2μM |
| 10×pfu PCR buffer(含Mg2+) | 2μl | 5μl | 1× |
| dNTP Mixture(10 mM) | 0.4μl | 1μl | 200μM each |
| pfu (2.5 U/μl) | 0.4μl | 1μl | 0.05U/μl |
| ddH2O | up to 20μl | up to 50μl | - |
注1:如果需要改变Mg2+浓度,根据下表调节
| PCR反应体系中Mg2+终浓度 | 2 mM | 2.5 mM | 3 mM | 4 mM |
| 20μl反应体系中25 mM MgSO4加入量 | 0μl | 0.4μl | 0.8μl | 1.6μl |
| 50μl反应体系中25 mM MgSO4加入量 | 0μl | 1μl | 2μl | 4μl |
注2:配制反应液时,请最后加入pfu,因为本酶有很强的3’-5’外切酶活性,有可能降解引物。
2、混匀后,离心快甩将反应液收集到管底。
3、PCR仪如果没有热盖加热的话,补加25μl矿物油。
4、PCR仪上执行以下程序:
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 初始变性 | 94℃ | 3-5 min | 1 |
| 变性 | 94℃ | 30 sec | 25-40* |
| 退火 | 50-60℃* | 30 sec | |
| 延伸 | 72℃ | 0.5kb/min* | |
| 最后延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
注:PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况,设定最佳的反应条件(温度、时间等)。
注意事项:
1、pfu 酶具有 3’-5’的外切酶活性,所以 pfu 酶扩增时延伸速度远比 Taq 酶低,应根据扩增产物的长度设置相应的延伸时间,一般情况下 pfu 酶的延伸速度为每分钟 0.5kb;同时 pfu 酶的 3’-5’的外切酶活性可能降解引物,所以应最后把pfu 酶到反应体系中,并立即进行 PCR 反应。
2、pfu 酶的热稳定性比 Taq 酶好,对于 GC 含量很高的模板,变性温度可以提高到98℃,对 pfu 酶的活性无影响。
储存条件:-20℃,有效期一年。
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文献和实验;还有一个原因是你设置的电压太高,最好是2~4v/cm,跑4~6小时比较合适(2)“我是按说明书上0。8%的琼脂糖”:凝胶浓度太低了,把凝胶浓度加大到2%,放心做,没问题的(3)“说明书上说混合温和”:那是怕你混匀太剧烈导致细胞基因组DNA断裂啊,注意很轻轻的混匀(4)“收集凋亡细胞时离心时转速”:我在实验室中是5000rpm,离心5min,我觉得足已mmyycc :我的ladder总是只有一条带,与对照组差别不大,用的是100v,1-1.5h,不知道是不是这个原因?溴酚兰跑到什么位置合适
ul以下。你的细胞我看可以更少些,50-60ul? 总体上就是该粗的就粗,该细的就就细。 wscoco78 :肯定会做出来的,我上次马虎,把热的样品直接拿去抽真空,沸腾出来许多,剩下一点还是出来ladder,唉,我都佩服自己了:)你最好选择2~4V/cm电压,用大的电泳槽(10cm以上),电泳过夜,当然别跑出去了,我是这样做的。 chujun_hust :我看了很多文献,好像文献中琼脂糖凝胶的浓度好像有很多种啊(比如1.5%,1%,2%)不知道哪一种效果最佳
发生细胞凋亡时,内源性核酸酶被激活,染色体DNA链在核小体之间被切割,形成180~200个碱基或其整数倍的DNA片段,将这些DNA片段抽提出来进行电泳,可得到DNA梯状条带(DNA ladder)。 一、材料与试剂 凋亡细胞; 蛋白酶K(500μg/ml) 8mol/L 醋酸钾 白细胞裂解液:pH8.0,10mmol/L Tris-HCl,10mmol/L NaCl,10mmol/L EDTA,1% SDS。 氯仿 无水乙醇,70%乙醇; 2%琼脂
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