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- 中国/上海
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- 2025年07月10日
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-20℃
- 保质期：
12个月
- 英文名：
Stx1 and stx2 gene fluorescence PCR detection kit (probe method)
- 库存：
18
- 供应商：
上海康朗生物科技有限公司
- 规格：
盒
大肠埃希菌(大肠O157)stx1和stx2基因荧光PCR检测试剂盒(探针法)反应需注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。
特点优势：
1. 特异性：
2. 重现性：
3. 灵敏性：
4. 实用性：
大肠埃希菌(大肠O157)stx1和stx2基因荧光PCR检测试剂盒(探针法)性能指标：
1. 试剂盒检测特异性为100%
2. 检测试剂盒重现性为100%
3. 灵敏度可达到103/ml
4. 有效期为6个月
大肠埃希菌(大肠O157)stx1和stx2基因荧光PCR检测试剂盒(探针法)反应五要素：参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。
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文献和实验大肠埃希菌的简介： 大肠杆菌（Escherichiacoli，E.coli）革兰氏阴性短杆菌，大小0.5×1～3微米。周身鞭毛，能运动，无芽。能发酵多种糖类产酸、产气，是人和动物肠道中的正常栖居菌。大肠埃希菌的致病物质之一是血浆凝固酶。根据致病性的不同，致泻性大肠埃希菌被分为产肠毒素性大肠埃希菌、肠道侵袭性大肠埃希菌、肠道致病性大肠埃希菌、肠集聚性黏附性大肠埃希菌和肠出血性大肠埃希菌5种。部分埃希菌菌株与婴儿腹泻有关，并可引起成人腹泻或食物中毒的暴发。肠出血性大肠埃希菌O157
大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli） 革兰氏阴性短杆菌，大小0.5×1～3微米。周身鞭毛，能运动，无芽。能发酵多种糖类产酸、产气，是人和动物肠道中的正常栖居菌。大肠埃希菌的致病物质之一是血浆凝固酶。根据致病性的不同，致泻性大肠埃希菌被分为产肠毒素性大肠埃希菌、肠道侵袭性大肠埃希菌、肠道致病性大肠埃希菌、肠集聚性黏附性大肠埃希菌和肠出血性大肠埃希菌5种。医学教育|网搜集整理部分埃希菌菌株与婴儿腹泻有关，并可引起成人腹泻或食物中毒的暴发。肠出血性大肠埃希菌O157：H7
CDC将大肠埃希氏菌O157：H7列为常规检测项目 EHEC的血清型>50种，最具代表性的是O157：H7.在北美许多地区，O157：H7占肠道分离病原菌的第二或第三位，是从血便中分离到的最常见的病原菌，分离率占血便的40%，6、7、8三个月O157：H7感染的发生率最高医学|教育网搜集整理。且0157是4岁以下儿童急性肾功衰的主要病原菌，所以CDC提出应将大肠埃希氏菌0157：H7列为常规检测项目。
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