酚/氯仿/异戊醇=25：24：1 PH〉7.5 100ml

重组胰蛋白酶最适 PH 和 PH 稳定性

mM Gly-NaOH(pH 9~12)，所有缓冲液均为 25℃ 下配制。底物在 25℃ 温浴 10 分钟后，开始测活。 2. pH 稳定性的研究 取活性为 10 mg/ml 纯酶液，分别在 pH 3~12 缓冲液中稀释 10 倍，在 25℃ 下温浴 2 h，取样品测定酶活，以水浴前酶液初始活性作为 100%，计算残余活性。缓冲液依次为 25 mM NaAc-HAc (pH 3~6)，25 mM Tris-HCl (pH 7~8)，25 mM Gly-NaOH (pH 9~12)，所有缓冲

人S蛋白100B(S-100B)酶联免疫分析

）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100 万 /ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS ， PH7.4 。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8℃ 的温度。加入一定量的 PBS （ PH7.4 ），用手工或匀浆器将标本匀浆

DNA的提取 掌握这些就够了

8. 加入 1 ul RNaseA（10 mg/mL），37℃ 处理 1 hr 9. 用酚（pH8.0）: 氯仿: 异戊醇 (25:24:1) 和氯仿: 异戊醇 (24:1) 各抽提 1 次（10,000 rpm，4℃ 离心 5 min） 10. 取上清，1/10V 3M NaAc,2.5V 体积的无水乙醇, -70℃ 沉淀 30 min 以上 11. 沉淀用 75% 乙醇漂洗，风干, 溶于 200 ulTE 中，-20 ℃ 保存备用 12. DNA 提取