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- DMPCR052
- 2025年07月13日
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普通电泳PCR：琼脂糖凝胶电泳，通过凝胶电泳技术发展，而产生的一种DNA片段的检测方法。此方法方便简单快捷。
采用适当的凝胶介质，在分子筛的作用下，到达分离核酸分子和检测核酸分子的目的。一般使用溴酚蓝和二甲苯晴作为指示剂。
一般实验时，需要注意倒胶的温度，胶的制作需要注意筛子拔出的方向，缓冲液不能太多。
服务内容：1 DNA片段的检测。
2 DNA片段的纯化。
3实验数据的分析和统计。
普通电泳PCR
聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的大特点，是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，进行比对。这也是"微量证据"的威力之所在。由1983年美国Mullis首先提出设想，1985年由其发明了聚合酶链反应，即简易DNA扩增法，意味着PCR技术的真正诞生。到如今2013年，PCR已发展到第三代技术。1973 年，台籍科学家钱嘉韵，发现了稳定的Taq DNA聚合酶，为PCR技术发展也做出了基础性贡献。
PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶适反应温度(72°C左右)，DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。
普通电泳PCR
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文献和实验2+ 1.5ul primer(F+R) 0.2ul Taq 0.2ul ddH2O 11.1ul 94℃ 3min 94℃ 45s 56℃ 45s 38cycles 72℃ 1min 72℃ 10min,4℃ hold forever PS：做逆转录时mRNA为2ug PCR结果是用1.5%凝胶电泳检测，除了内参GAPDH，没有
Rate 3.35 ºC/Sec Enabled to run FAST Chemistry Yes Temperature Accuracy ±0.25 ºC (35 ºC – 99.9 ºC) Temperature Range 4.0 ºC to 99.9 ºC Temperature Uniformity Weight 10.6 kg (19.9lb) PCR Volume Range 10-80 µL Instrument Memory USB
realtime PCR 在PCR体系中加有sybr green或者探针，普通的RT-PCR则没有。realtime PCR上机后从电脑上直接读出结果，普通的RT-PCR需要跑胶、紫外线下观察结果或用凝胶成像系统分析。realtime PCR一次测多种mRNA表达需要多色荧光，这就需要仪器支持多色荧光并且探针用不同荧光标记。普通的RT-PCR，可以采取双重PCR的方法同时检测2种mRNA表达。
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