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sigma
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sigma
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50-01-1
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D5879-100ML DMSO Sigma
R2625-50mg 维生素A Sigma
G6378-100UN 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 Sigma
M4125-100G D-甘露糖醇 Sigma
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文献和实验液的 pH、盐离子浓度、添加剂（如 5% 甘油、1mM DTT) 等。 原因三 HIS 标签没有表达或丢失或暴露不充分。 建议 1 用 anti-HIS 的抗体进行 WB，检测 HIS 标签是否存在。 建议 2 将蛋白用 4-6M 盐酸胍或 4-8M 尿素变性后，让 HIS 标签充分暴露出来，看是否能与填料结合。 建议 3 改变 HIS 标签的位置或者增加其数目（常用 6-12 个 HIS），增加暴露和结合机会。 建议 4 改变金属结合离子，除了 Ni2+，Cu2+、Zn2+、Co2+ 也可以用来进
离子浓度、添加剂（如5%甘油、1mM DTT）等。 原因三 His标签没有表达或丢失或暴露不充分。 建议1 用anti-His的抗体进行WB，检测His标签是否存在。 建议2 将蛋白用4-6M盐酸胍或4-8M尿素变性后，让His标签充分暴露出来，看是否能与填料结合。 建议3 改变His标签的位置或者增加其数目（常用6-12个His），增加暴露和结合机会。 建议4 改变金属结合离子，除了Ni2+，Cu2+、Zn2+、Co2+也可以用来进行His标签的捕获。 2、His标签蛋白结合了，但是洗脱不充分 原因
抗 His 标签的抗体进行 WB 检测）且充分释放至上清中，确认蛋白是流穿还是未被洗脱 。 A：若目的 His 标签蛋白流穿 ● 样品或结合缓冲液的条件不合适，注意螯合剂或强还原剂以及咪唑的浓度。 ● His 标签蛋白与填料的结合较弱：降低上样流速或增加孵育时间；增加标签 His 的数量（常用 6～10 个）。 ● His 标签未充分暴露：在变性条件（4～8 M 尿素或 4～6 M 盐酸胍）下进行纯化或测试；重新构建克隆，改变 His 标签的位置。 ● 尝试其他的金属离子：如 Zn
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