北京现货QN0946型Oligo(dT)15引物促销

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名称：北京现货QN0946型Oligo(dT)15引物促销
英文名：Oligo(dT)15 Primer
品牌：百奥莱博
编号：QN0946
规格：20ug
产地：国产|进口
Oligo(dT)15引物也可称为寡聚胸腺嘧啶引物，是只有胸腺嘧啶组成的寡居核苷酸链，长度范围在10～20个碱基之间，常用的Oligo(dT)15 Primer有15碱基、16碱基和18碱基。

Oligo(dT)15 Primer利用了碱基互补配对的原则以及mRNA含有poly(A)尾巴的特点，巧妙设计而成。由于这个特点，使得Oligo(dT)15 Primer只能和mRNA配对，并在适宜的条件下完成反转录。原核生物的RNA，真核生物的rRNA和tRNA无poly(A)尾巴，因此用Oligo(dT)15 Primer作为反转录引物时，这些RNA均不能作为模板。这限制了反转录后获得的总cDNA的数量和种类。另外，若mRNA过长，可能会形成二级结构，这时Oligo(dT)15 Primer扩增也会有一定的困难。同样提示我们，在反转录时根据需要选择引物。

目前有的公司和实验室提倡Oligo(dT)15和Random Primers混合使用，以此保障获得更为完整的cDNA。

储存条件 ：-20℃

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L-半胱氨酸盐酸盐无水物 GPDA 52-89-1
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DL-丙氨酸乙酯盐酸盐 L-Serinol 617-27-6
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87915-38-6 Dextran Blue 2000 蓝色葡聚糖 2000
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CYB168002 特级新生牛血清 100ml/瓶
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·潮霉素B
编号：QN0095
英文名称：Hygromycin B
规格：1g
本品由吸水链霉菌代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成，从而杀死原核(如细菌)、真核(如酵母菌，真菌)和高等哺乳动物真核细胞。本品是无菌的潮霉素B溶液(100mg/ml)，可直接用培养液稀释使用。

CAS：31282-04-9
分子式：C20H37N3O13
分子量：527.52
储存条件：2～8℃
性状：澄清或轻微浑浊黄色溶液

大肠杆菌( Escherichia coli.)来源的潮霉素抗性基因(hyg或hph)，编码潮霉素B磷酸转移酶，将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物，从而起到解毒作用。针对这一原理，潮霉素B是一种非常有用的选择性标记，用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞。另外，由于作用模式的差异，常与G418，Zeocin™ 和Blasticidin S联合使用进行双抗性阳性细胞株的选择。潮霉素B还能用作抗病毒剂，因其选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞，且具有抑制翻译的功效。还可混合入动物饲料中起到驱虫功能。

使用方法：
1. 常用筛选浓度
注意：潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve)，即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。
一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。

2. 杀灭曲线的建立
注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素最低浓度，可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现，至少选择5个浓度。
1)第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜;注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2)根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。

终浓度(μg/mL)	培养基体积(ml)	5mg/ml潮霉素B加入体积(ml)
50	9.9	0.1
100	9.8	0.2
250	9.5	0.5
500	9.0	1.0
750	8.5	1.5
1000	8.0	2.0

3)第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4)接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5)按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的最低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。

3. 稳定转染细胞的筛选
1)转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果最好。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%。
2)每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3)筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4)挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5)之后更换正常培养基培养即可。


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扁桃苷 Dihydrostreptomycin sesquisulfate 29883-15-6
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4-乙基-2-甲氧基苯酚 Dextrin 2785-89-9
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10034-99-8 Mangnesinm Sulfte 硫酸镁七水
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5-溴代水杨酸 Safranine T 89-55-4
蓝色葡聚糖2000 Rosiglitazone maleate 87915-38-6
BL1091 胎牛血清

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