超级杂交液(Oligo探针)品牌

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应超级杂交液(Oligo探针)品牌，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：超级杂交液(Oligo探针)品牌
编号：BTN130904
规格：10mL
英文名：Super hybrid solution(Oligo probe)
本产品为即用型Oligo探针专用核酸杂交液。核酸杂交一般是指用一种标记的核酸探针与印迹膜上的核酸进行杂交，由此检测印迹膜上是否存在与探针同源的核酸分子(靶分子)。核酸杂交是分子生物学的基本技术之一，应用非常广泛。

产品特点：
1. 既可以用于DNA Oligo探针，也可以用于RNA Oligo探针。
2. 即开即用，使用方便。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 对 Oligo探针的杂交，Tm=GC 数量×4℃+AT 数量×2℃。
2. 对 Oligo探针的杂交，最佳杂交温度一般比Tm低5℃。由于Oligo 较短，更容易受各种因素影响(如错配率、修饰碱基比例等)，所以最佳温度需要适度摸索和优化。
3. 确定洗膜温度: Oligo探针可以室温洗膜。
4. 预杂交步骤
预杂交就是用不含Oligo探针的本产品跟印迹膜进行孵育，其目的是用所含的非特异性DNA分子(鲑精DNA或小牛胸腺DNA)及其它高分子化合物将印迹膜上会非特异地吸附Oligo探针分子的位点封闭，否则这些位点会吸附Oligo探针，造成高背景。
1)将结合了靶分子的硝酸纤维素印迹膜或尼龙印迹膜浸泡于自备的6×SSC溶液中，使其充分湿润。
2)将湿润的印迹膜置于一塑料杂交袋中(塑料袋最好预先封口，再剪掉一角，留一个小口)，按每平方厘米印迹膜加0.2mL本产品的比例沿小口加入本产品，然后用塑料封口机将口封牢。
3)将此塑料袋浸没入温度设定在最佳杂交温度的恒温水浴中或杂交炉中，保温1-2小时，延长到12-16小时亦可。注意保温过程中塑料袋应在不停的摇动状态中，使本产品与印迹膜充分接触。
5. 杂交步骤
1)将Oligo探针加入到完成了预杂交的杂交袋中(先用剪刀剪一小口，加入Oligo探针后用热封机封口)。Oligo探针的加入量视探针标记效率而定，一般要求终浓度不能低于1-2 ng/mL。如果检测基因组中的单拷贝基因，Oligo探针的加入量应加大，而对于检测克隆的基因片段，则Oligo探针的量可减少。如果是放射性Oligo探针，应将此塑料袋套在另一塑料袋之中，以避免杂交袋发生遗漏、污染工作环境。
2)在选定的杂交温度下继续保温，时间一般为6-12小时。
6. 洗膜步骤
注意在下面的所有操作过程中，一定不要使印迹膜干燥。
此步是将与印迹膜非特异结合的探针分子洗去而只留下特异结合的Oligo探针分子。由于非特异性杂交的杂交分子解链温度较低，热稳定性较差，在一定的温度和较低的离子强度下，即可洗掉。
1)杂交完毕，取出塑料袋，剪去一角，倒出所有的含Oligo探针的杂交液。此含Oligo探针的杂交液可以多次使用再倒弃。
2)剪开杂交袋，用镊子取出印迹膜，浸没于大量的2×SSC(含0.5 % SDS)溶液中，室温下振荡漂洗15分钟。
3)重复上步操作一次。
4)将印迹膜转移至0.1×SSC(含0.1% SDS)溶液中，在计算好的洗膜温度下振荡漂洗30分钟至1小时。
5)重复上步操作一次。
6)将印迹膜转移到滤纸上，吸去表面液体后印迹膜即可用于后续检测。

疑难解答：
问题一：高背景(有或没有杂交信号)
解决方案：将放射性Oligo探针的比活降低到2×10E6 cpm/mL以下；将非放射性Oligo探针的终浓度降低到30 ng/mL以下；减少杂交时间；适当提高杂交温度。
问题二：没有杂交信号或杂交信号非常弱
解决方案：杂交过程中应该连续振荡，不应该有气泡，避免印迹膜变干。将放射性Oligo探针活性提高到>5×10E8 cpm/ng，提高非放射性标记Oligo探针的终浓度；适当降低杂交温度。

关于超级杂交液(Oligo探针)品牌的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·超纯水
编号：BTN100935
英文名称：Ultrapure Water
规格：250mL
本品是指将水中的导电介质几乎全部去除，又将水中不离解的胶体物质、气体和有机物均去除至很低程度的水。可以用于各种分子生物学实验。

储存条件：常温运输和保存、有效期两年。

·鲁米诺
编号：BTN131142
英文名称：Luminol
规格：1g
本产品又叫发光*。化学式C8H7N3O2。鲁米诺反应又叫*基*二酰一胼反应，生物系统中的一些酶如辣根过氧化物酶HRP，以及一些金属化合物如血液中的铁，可以催化经过过氧化*的分解，使过氧化*变成水和单氧，其中单氧可氧化鲁米诺，鲁米诺经氧化后可发出蓝光。这种蓝光可经X光胶片曝光显影、荧光CCD扫描成像，或直接在弱光下肉眼观察。


储存条件：低温运输，4℃保存，有效期一年。避免长时间暴露于光线下，请勿冷冻。

·Southern级真菌DNA提取试剂盒
编号：BTN130943
英文名称：Fungus DNA extraction kit(Southern Grade)
规格：10次
本产品又叫发光*。化学式C8H7N3O2。鲁米诺反应又叫*基*二酰一胼反应，生物系统中的一些酶如辣根过氧化物酶HRP，以及一些金属化合物如血液中的铁，可以催化经过过氧化*的分解，使过氧化*变成水和单氧，其中单氧可氧化鲁米诺，鲁米诺经氧化后可发出蓝光。这种蓝光可经X光胶片曝光显影、荧光CCD扫描成像，或直接在弱光下肉眼观察。


储存条件：低温运输，4℃保存，有效期一年。避免长时间暴露于光线下，请勿冷冻。

·湿法电转液(干粉)
编号：BTN100928
英文名称：Wet Transfer Buffer Powder
规格：20L
本产品配制的溶液适用于湿转时，湿润、浸泡电转膜及垫子和用作电转工作缓冲液。用前直接加入蒸馏水与甲醇混匀即可。不含有机溶剂，便于储存和运输，且操作简便，一般适合分子量在100KD以上的蛋白。本产品可以回收重复使用2-3次，节约研发成本，如果转膜液颜色变成浅棕色或黄褐色，应该丢弃。

储存条件：常温运输、4℃保存，有效期一年。


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·T4 DNA连接酶
编号：BTN60609
英文名称：T4 DNA Ligase
规格：200U
T4 DNA连接酶从表达T4 gene 30的E.coli细胞中分离纯化而得，由一个分子量为68KDa的单亚基组成。

产品用途：
1．催化连接反应，即dsDNA，dsRNA和DNA/RNA分子的粘性末端和平末端5´-P末端和3´-OH末端之间形成磷酸二酯键。
2．修复dsDNA反应中的切口(Nick)。
3．催化pyrophosphate和ATP之间的磷酸交换反应(Weiss酶单位定义原理)
4．需要ATP、Mg2+和DTT，最佳pH为pH7.5-8.0。
5．NaCl浓度在200mM以上时有抑制作用。
6．1%～10%PEG和150～200mM NaCl能促进连接反应(尤其是平末端DNA)效率。

产品组成：

 

成分	规格
T4 DNA连接酶(5U/μL)	40μl
10×T4连接酶Buffer	300μl
说明书	1份

注意：本公司本产品的单位按Weiss 单位定义，200个Weiss单位相当于25000个连接单位，1000个Weiss 单位相当于125000个连接单位。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：(DNA片段和载体DNA的连接)
1．在微量离心管中制备下列连接反应液

10×T4 DNA Ligase Buffer	2.5μl
自备插入DNA片段	约0.3pmol
自备载体DNA	约0.03pmol
T4 DNA Ligase	1μL
dH2O	up to 25μL

2．16℃过夜反应
3．加入2.5μL的3M醋酸*(PH5.2)
4．加入62.5μL的预冷无水乙醇，-20℃放置30-60分钟
5．离心回收沉淀，用70%的预冷无水乙醇清洗沉淀，真空干燥
6．25～50μL TE溶解，10-20μL转化至100μL感受态细胞中。


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·即用型LB平板培养基(含Amp)
编号：BTN130848B
英文名称：LB Petri Dish(Amp)
规格：10块
本产品为即用型LB平板培养基，A型为无抗生素LB平板，B型为LB-Amp平板，C型为LB-Kan平板，LB-Tet平板。

储存条件：低温运输及保存，有效期半年。

·大肠杆菌OmniMAX2-T1 Phage Resistant化学感受态细胞
编号：BTN140430
英文名称：E.coli OmniMAX2-T1 Phage Resistant Chemical Competent Cell
规格：0.1mL*10
 本产品是采用大肠杆菌OmniMAX2-T1 Phage Resistant菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，本产品转化效率可达10⁹。本产品具有四环素抗性。

菌株基因型为：F- {proAB+ lacIq lacZΔM15 Tn10(TetR)Δ(ccdAB)} mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80(lacZ)ΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169 endA1 recA1 supE44 thi-1 gyrA96 relA1 tonA panD

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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