北京核蛋白提取试剂盒价格

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名称：北京核蛋白提取试剂盒价格
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
规格：50T|100T
英文名：Nuclear Protein Extraction Kit
本核蛋白提取试剂盒提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白的方法。整个过程只需约60分钟就可以将核蛋白和浆蛋白从细胞中分离出来。得到的蛋白可以用于Western blot等实验。本试剂盒通过浆蛋白抽提试剂使细胞膨胀破裂，释放出胞浆蛋白，再通过离心得到细胞核。然后通过核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。本试剂盒可以抽提50/100个样品(每个样品约2×106个Hela细胞或40mg组织)。

体外培养细胞的操作方法(裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行)：

1．根据用量取适当的浆蛋白抽提试剂和核蛋白抽提试剂加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。PMSF需现用现加，若目标蛋白含有丰富的半胱氨酸，可以在两种蛋白抽提液中加入DTT至终浓度0.5mM。
2．对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS洗一遍，用细胞刮刀收集细胞，或用EDTA消化后吹打下细胞(最好不用胰酶硝化，以免胰酶消化目的蛋白)。500g离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清留下沉淀备用。
3．对于悬浮细胞：用PBS洗一遍，500 g离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
4．每20μl细胞沉淀加入200μl浆蛋白抽提试剂(2×106个细胞沉淀的体积约20μl或40mg)。
5．用移液器吹打或高速涡旋15秒(可适当延长)，必须使细胞沉淀完全分散开成单细胞悬液。细胞沉淀分散不完全会导致蛋白产量降低。
6．冰浴10分钟。
7．最高转速剧烈涡旋10秒，4℃，12000～16000g离心10分钟。
8．上清即为抽提得到的细胞浆蛋白，立即吸取上清至预冷的样品管中备用，进行后续的PAGE、Western等实验，但蛋白浓度较低，可根据需要进行相应浓缩。
9．沉淀即为细胞核，要完全吸尽残余的上清(避免细胞浆蛋白的污染)，加入50-100μl核蛋白抽提试剂。
10．用移液器吹打或高速涡旋15秒(可适当延长)至沉淀完全分散，冰浴10分钟。
11．最高转速剧烈涡旋10秒，4℃，12000～16000g离心10分钟。
12．立即吸取上清至预冷的样品管中，此即为抽提得到的细胞核蛋白。可进行后续实验或-70℃冻存。 对于组织样品：把组织称重后，尽可能切成非常细小的碎片，按每50mg组织加入200μl～500μl PBS，用匀浆器冰上匀浆制成细胞悬液，500g离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清，收集沉淀。加入200μl浆蛋白抽提试剂后接上述步骤5。

注意事项：
1．裂解得到的蛋白样品，由于含有较高浓度的去垢剂干扰，不能用Bradford法测定蛋白浓度，可以选用本公司生产的BCA蛋白定量试剂盒(货号QN1075)测定蛋白浓度。
2．对于组织样品，本试剂盒适用于新鲜组织，对冻存组织抽提效果较差。
3．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存条件：核/浆蛋白抽提试剂4℃保存，PMSF于-20℃保存。

更多有关北京核蛋白提取试剂盒价格的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销售以下产品：

·甘露聚糖
编号：QN0165
英文名称：Mannan
规格：100mg
CAS号：9036-88-8

·总RNA提取试剂盒
编号：QN0926
英文名称：Total RNA Extraction Kit
规格：50T|100T
操作步骤：

1. 样品处理：
a. 植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。
b. 动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
c. 贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。
d. 细胞悬液：离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。
e. 血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10000rpm离心1分钟。弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1ml裂解液混匀。
2. 将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。
3. 向匀浆样品中加0.2ml氯*(代"仿")，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。
4. 2～8℃ 12000rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。
5. 吸附柱前处理：在吸附柱中加入500ul 洗柱液，室温放置2分钟，2～8℃ 12000 rpm离心2min，弃废液。
6. 第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀，加入吸附柱静置2分钟，2～8℃ 12000rpm离心2min，弃废液。
7. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，2～8℃ 12000rpm离心2min，弃废液。
8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液，2～8℃ 12000rpm离心2min，弃废液。
9. 12000rpm离心2min，弃掉收集管，将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。
10. 将吸附柱放入新管中，向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O，室温放置5min，12000rpm室温离心2min即得到RNA。

注意事项：
1，所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品，操作过程要小心，带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。
2，RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯，需电泳检测。

储存条件：2～8℃


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·羟甲基甘氨酸
编号：QN0129
英文名称：Tricine
规格：10g|100g
本品N-三(羟甲基)甲基甘氨酸用作生物缓冲液组分，用于分离低分子量的肽。

CAS号：5704-04-1
分子式：C6H13NO5
分子量：179.2
储存条件：室温干燥保存
纯度：≥99.0%
性状：白色结晶或结晶性粉末

·二硫苏糖醇
编号：QN1112
英文名称：DTT
规格：5g|25g|100g
本品是一种还原蛋白质S-S键的试剂;生化研究用作巯基保护剂;酶的专一性抑制剂;测定酶活力。SDS-PAGE上样缓冲液的配制等。

别名：DTT
CAS号：3483-12-3
分子式：C4H10O2S2
分子量：154.25
纯度：≥97%(滴定)
性状：白色针状或白色颗粒、粉末
储存条件：2～8℃

·丁香醛
编号：QN0829
英文名称：Syringaldehyde
规格：5g
CAS号：134-96-3

·ECL化学发光法检测试剂盒(山羊IgG)
编号：QN1156
英文名称：ECL Western Blotting Detection Kit(Goat IgG)
规格：1盒
本试剂盒主要用于western blotting的化学发光显色，含有HRP标记抗山羊IgG二抗。

SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，加入发光底物后，能让胶片感光。经显影和定影后，可以在胶片上显示出条带(抗原所在位置)。

试剂盒组分：
封闭试剂———————————30g(可配制400ml)
10倍浓缩抗体稀释液——————50ml
HRP标记山羊IgG二抗——————0.3ml，效价1:500～1000
ECL显色液-——————————25mlA+25mlB

常规电泳转膜后:
1)清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T漂洗3次每次5min,以尽量洗去转印膜上的SDS，防止影响后面的抗体结合。
2)按5g封闭试剂加100ml双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜放入封闭液内，置摇床孵育，室温封闭30min。用TBS-T缓冲液(PH7.6)洗膜，室温漂洗3次每次5min。
3)将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×(10ml,10×抗体稀释液加入90ml双蒸水，混匀，可4℃保存三个月)。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。
4)用1×的抗体稀释液稀释一抗。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
注：如果所加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。
5)用TBS-T缓冲液(PH7.6)洗膜，室温漂洗3次每次5min。
6)用1×的抗体稀释液稀释二抗。根据用量，按10ml抗体稀释液加入15ul的HRP标记二抗的比例，配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口，37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
7)用TBS-T缓冲液(PH7.6)洗膜，室温漂洗3次每次10min。
8)根据用量，取ECL发光液A、B等量混匀，加在膜正面，暗室显色1～5分种。倾去显色液，小心用纸吸去显色液，在上面盖一层平整的透明纸。再取出感光胶片，做好标记，轻轻的放在膜上，显色30秒到1分钟，取出胶片浸入显影液中，观察显色情况，再放入定影液中1分钟。根据条带强弱，再次感光时可减短或者加长感光时间(从5秒到30分钟)以期达到理想结果。
注意事项：
1.请根据一抗来源选择试剂盒。
2.可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长最终漂洗次数与时间。如果
条带过弱，可增加抗体浓度，可延长抗体孵育时间或加长感光时间。
3.TBS-T(0.01M，PH7.6)配制方法：称取NaCl 8.5g，Tris 1.21g，用800ml的双蒸水溶解，用盐酸调PH到7.6，再加入0.5ml Tween-20，用双蒸水加至1000ml，混匀即可。(也可按照自己的配制习惯来配制)

储存条件：-20℃避光，有效期一年。


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