细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-EGFP/PI)厂家

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北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销售，产品线涵盖细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-EGFP/PI)厂家在内的细胞生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-EGFP/PI)厂家
编号：SY0472
规格：20 rxn
英文名：Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit
品牌：百奥莱博
Annexin V-EGFP/PI细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit）是用EGFP标记了的Annexin V作为探针，来检测细胞早期凋亡的发生，可用荧光显微镜、流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。

其检测原理为：在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

另外，本试剂盒中还提供了碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此，将Annexin V与PI联合使用时，PI 则被排除在活细胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡细胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被EGFP 和PI 结合染色呈现双阳性（Annexin V+/PI+）。

产品组份：
Annexin V-EGFP———————100 μl
PI Staining Solution————100 μl
1×Binding Buffer——————8 ml

注意事项

1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，PI摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-EGFP的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇时胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA，EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞，比如在检测凋亡的同时检测细胞周期，只能选用Annexin V-FITC，而不能选用Annexin V-EGFP，因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定前需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育，并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片，可以和Annexin V结合，对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液，请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS，能与Annexin V结合，从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-EGFP和PI是光敏物质，在操作时请注意避光。

储存条件：4℃，有效期一年。

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·STAT3-GFP报告基因质粒
编号：SY0155
英文名称：STAT3 GFP Reporter Plasmid
规格：1μg
STAT3报告基因是用于检测STAT3二聚体和STAT1/STAT3异质二聚体的转录活性水平为目的的报告基因。激活STAT3后形成STAT3二聚体和STAT1/STAT3异质二聚体，它们与SIS-inducible element（SIE）反应元件进行相互作用调控细胞的生长和凋亡。STAT3(signal transducers and activators of transduction-3)报告基因与多种恶性肿瘤的发生、发展和侵袭转移关系密切。

STAT3报告基因主要用于监控细胞STAT3信号通路中的STAT3转录活性、肿瘤治疗药物的研发以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMSTAT3-GFP是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个STAT3结合位点，可以高效地检测STAT3的激活水平。由于载体采用了GFP作为报告基因，更便于后续的检测。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。另外，由于质粒体积减小，使得STAT3-GFP报告基因更易于转染。

质粒图谱



pGMSTAT3 -GFP质粒测序引物
5’-TAGCAAAATAGGCTGTCCC-3’

使用说明
pGMSTAT3-GFP可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。

注意事项
1）本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
2）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

储存条件：-20℃。

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