PPAR-GFP报告基因质粒库存

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产供应PPAR-GFP报告基因质粒库存，我公司销售全品类的细胞生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：PPAR-GFP报告基因质粒库存
编号：SY0224
规格：1μg
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
PPAR-GFP报告基因是用于检测PPAR转录活性水平为目的的报告基因。PPAR(Peroxisome proliferator-activated receptor) PPAR）是控制环境与饮食刺激的关键调节物。其中α受体主要参与肝细胞的氧化过程。β受体则参与了脂肪细胞的分解过程，γ受体与脂肪细胞的生成过程有关。

PPAR-GFP报告基因主要应用于Peroxisome Proliferator-Activated Receptor信号通路、药物研究、相关基因的调控和功能的研究。

pGMPPAR-GFP是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个PPAR结合位点，可以高效地检测PPAR的激活水平。由于载体采用了GFP作为报告基因，更便于后续的检测。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。另外，由于质粒体积减小，使得PPAR-GFP报告基因更易于转染。

质粒图谱



pGM PPAR -GFP质粒测序引物
5’-TAGCAAAATAGGCTGTCCC-3’

使用说明
pGMPPAR-GFP可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。

注意事项
1）本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
2）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

储存条件：-20℃。

除PPAR-GFP报告基因质粒库存外，我公司正在打折促销以下产品：

·pUM19-T Vector TA克隆载体
编号：SY0022
规格：5μg
pUM19-T载体是一种高效克隆PCR产物（TA Cloning）的专用载体。它是在线性化pUC19载体的基础上，在两侧的3’端添加碱基T而制成。特殊的纯化方式使得超过99%的pUM19载体两端都具有3’-T突出端，因此极大的降低了载体自连率。由于大部分耐热聚合酶反应时都会在PCR 产物的3’端添加一个A，可与pUM19载体3’端的T互补连接，因此可大大提高PCR 产物的连接和克隆效率。pUM19载体多克隆位点位于β-lactamase基因内，可以通过蓝白斑快速筛选含有插入片断的重组子。连接使用的PCR 片段3’端应带有A 末端；Pfu DNA Polymerase等高保真聚合酶的扩增产物不带A，应先在其末端加A后再进行TA克隆。本品随载体提供对照片段(500bp)用于阳性对照反应。

1.将载体置于冰上融化。建议第一次使用时将载体分装成小份保存，每次取一支使用。

2.按下表配置连接反应体系
ddH2O——To 10 μl
10×Ligase Buffer——1 μl
pUM19-T Vector (50 ng/μl)——1μl (约0.025 pmol)
插入片段*——0.075 pmol～0.25 pmol
T4 DNA Ligase (400 U/μl)——1 μl
注：插入片段与载体的摩尔比应在3:1～10:1之间。请根据琼脂糖凝胶电泳或紫外分光光度计检测确定插入片段的浓度，并根据其大小计算摩尔量。1 pmol 1 kb双链DNA的质量约为660 ng。

3.对照反应体系（可选）：
ddH2O——6 μl
10×Ligase Buffer——1 μl
pUM19-T Vector (50 ng/μl)——1 μl (约0.025 pmol)
500 bp control insert(50 ng/μl)——1 μl (约0.15 pmol)
T4 DNA Ligase (400 U/μl)——1 μl

4.轻轻吹打混匀反应体系，室温22-26℃孵育1-2小时，或16℃过夜。
5.转化：
1) 将连接产物加入到100 μl感受态细胞中(连接产物的体积不要超过感受态细胞体积的1/6)，轻轻弹匀，冰上孵育30分钟。
2) 将离心管置于42℃水浴，不要晃动，准确热激90秒后，立刻置于冰水浴中，不要晃动，静置2-3分钟。
3) 向离心管中加入900 μl LB或SOC培养基，150 rpm, 37℃振荡培养45分钟，使菌体复苏，抗性基因表达。
4) 2500 g离心5分钟，去掉900 μl上清。用剩余培养基将菌体重悬混匀，用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀，室温正置10分钟。待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。
注：如果使用超级感受态细胞（转化效率>108 cfu/μg），可以直接吸取100-200 μl孵育后的菌液涂板。剩余菌液可在4℃保存，一周之内都可重新涂板。

储存条件：-20℃。

注意事项
1) 尽量避免反复冻融，可将载体和对照片段分装成小份后保存。
2) 为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。


PPAR-GFP报告基因质粒库存关键词：SY0224,PPAR-GFP报告基因质粒,PPAR GFP Reporter Plasmid

H1101 狗血浆(去红细胞、无菌过滤)
ARB10990 人冷球蛋白(CG)Elisa分析 Human cryoglobulin,cg ELISA KIT
ARB12484 大鼠总三碘甲腺原氨酸(TT3)elisa检测操作说明书 Rat tt3 ELISA KIT
ARB12963 小鼠血管紧张素转化酶(ACE)Elisa方法检测 Mouse angiotensin converting enzyme,ace ELISA KIT
魔芋胶 D-Val-Leu-Lys PNA?2HC1 37220-17-0
ARB11687 人葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)ELISA代测服务 Human glucose dependent insulin releasing polyPeptide,gip ELISA KIT
ARB14046 猴γ干扰素(IFN-γ)含量分析 Monkey interferon γ ,ifn-γ ELISA KIT
ARB13122 小鼠促甲状腺素(TSH)检测服务 Mouse thyroid stimulating hormone,tsh ELISA KIT
F030511 FITC标记羊抗乙肝核心抗原抗体 Polyclonal Goat Anti-HBcAg*FITC
ARB11165 人卷曲蛋白8(FZD8)酶标法分析 Human frizzled homolog 8,fzd8 ELISA KIT
ARB10038 人I型胶原C端肽(CTX-I)elisa测定使用说明书 Human c-teloPeptide of type i collagen,ctx-i ELISA KIT
四草酸钾 L-Leucinol 6100-20-5
ARB14112 人艰难梭菌毒素B 血清中含量检测
硫酸博来霉素 Sulfameter 9041-93-4
PY02-165 碱性胆盐琼脂(AB) 250克
ARB10438 人甲状腺刺激免疫球蛋白(TSI)定量分析 Human thyroid stimulating immunoglobulin,tsi ELISA KIT
PPAR-GFP报告基因质粒库存关键词：SY0224,PPAR-GFP报告基因质粒,PPAR GFP Reporter Plasmid


·腔肠素f
编号：SY0237
英文名称：Coelenterazine f
规格：1×500μg
本品为粉末形式供应的腔肠素f（Coelenterazine f），与天然腔肠素结构上的唯一差别在于将其R-1位酚基上的羟基替换成氟（F），是水母发光蛋白（aequorin）的首选底物。当腔肠素f和水母蛋白（Apoaequorin）一起被部分氧化得以活化，生成腔肠素的亚稳态复合物（aequorin）。与天然腔肠素-水母蛋白（Apoaequorin）复合物产生的光子总数相比，此复合物仅产生80%的光子能。但是其优点在于：仅需非常少的时间来生成aequorin复合物（通常来说此步反应很慢，比如60min内仅有40%的天然腔肠素完成反应）。另外，当其与Ca2+接触，即可快速且高产量的发光，产能强度是天然腔肠素的20倍。具有最好的细胞渗透性。当需要极高的Ca2+检测灵敏度来研究水母蛋白再生实验，推荐使用本底物。

腔肠素（Coelenterazine）是自然界中资源最丰富的天然荧光素，是绝大多数海洋发光生物（超过75%）的光能贮存分子。腔肠素可作为许多荧光素酶的底物，比如海肾荧光素酶（Rluc），Gaussia分泌型荧光素酶（Gluc），以及包括水母发光蛋白（aequorin）和薮枝螅发光蛋白（Obelia）在内的光蛋白（Photoproteins）。其发光原理是：以腔肠素为底物的荧光素酶在有分子氧的条件下，氧化腔肠素，产生高能量的中间产物，并在此过程中发射蓝色光，峰值发射波长约为450~480nm。与甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶系统不同，腔肠素/荧光素酶系统不需要三磷酸腺苷（ATP），因此更便于体内生物荧光的研究。因此，腔肠素常用作基于荧光分析的报告基因检测以及活体动物检测的发光底物。

腔肠素还能在酶非依赖性的氧化体系中自发荧光，细胞和组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子能够增强该自发光信号，因此其也可用来检测细胞/组织内活性氧（ROS）水平。

腔肠素具有能量转移的特性— —生物发光共振能量转移（Bioluminescence Resonance Energy Transfer，BRET），利用此特性，当与荧光蛋白如GFP的突变体（增强的黄色荧光蛋白，EYFP）联合使用，在底物腔肠素存在的情况下，荧光素酶（如Rluc）催化底物发生蓝光，能量随之转移到EYFP上，发出绿光（~530nm）。这两个蛋白的相互作用可以通过Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白两者间的相互关系来评估，适用于研究蛋白-蛋白之间的相互关系。另外，由于BRET的信号可通过比较绿光和蓝光的量来进行测定，消减了因细胞数、细胞类型和其他实验变量而引起的数据变量，适用于高通量筛选如药物开发。

更为重要的一个功能，水母发光蛋白复合物（Aequorin）由22kDa的水母蛋白（Apoaequorin protein）、分子氧和底物腔肠素组成。只有当钙离子（Ca2+）与该复合物结合后，腔肠素才能被氧化生成高能量产物Coelenteramide，同时释放出CO2和蓝色荧光（~466 nm）。正是此Ca2+依赖性的反应过程（见图1），使得腔肠素非常适用于监测活细胞内钙离子水平。与常规的荧光钙离子指示剂相比，其主要具有以下几个优点，1）能检测较大范围的钙浓度 – 从0.1 μM至 >100μM；2）样品无自体荧光，背景荧光低于使用荧光钙离子指示剂；虽然信号比使用荧光钙离子指示剂弱，但是通过成像仪器可以得到更高的信噪比，因此具有更高的灵敏度。3）水母发光蛋白复合体能够稳定维持在细胞内，使其能够进行数小时至数天的钙离子监测。



图1. 腔肠素作为水母发光蛋白辅助因子的Ca2+依赖反应流程

目前商业化的腔肠素应用最普遍的是天然腔肠素（Coelenterazine native），另外还有很多腔肠素衍生物如Coelenterazine h、Coelenterazine 400a、Coelenterazine cp、Coelenterazine f、Coelenterazine hcp、Coelenterazine n等被一一合成。理论上这些腔肠素可用于相同的实验，但是由于其发光波长，细胞膜渗透性，光量子效率上的差异，使得其在相同应用上表现出不同的实验效果。因此非常有必要根据具体实验目的选择最合适的腔肠素底物（见附录1，腔肠素及其衍生物的特性）。

CAS：123437-16-1
分子式：C26H20FN3O2
分子量：425.46
外观：黄色至褐色粉末
溶解性：溶于甲醇或者乙醇，不可溶于DMSO
纯度：＞95%（TLC）
结构：



运输和保存方法：冰袋运输。粉末-20℃避光干燥保存，最好保存在惰性气体下以避免接触空气。

注意事项
1）腔肠素f粉末最好使用惰性气体-氮气或氩气，在密封良好的塑料管中避光保存于-20℃，长期保存于-70℃。管内即使有少量空气进入，也可能造成f氧化失活，使量化分析的结果难以在不同试验间进行比较。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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