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名称:免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液哪里卖
英文名:Lysis Buffer for WB/IP Assays
编号:SY0318
规格:100ml
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
本品细胞/组织裂解液,WB/IP裂解液,是一种非变性条件下的裂解液,含有sodium pyrophosphate、β-glycerophosphate、EDTA、sodium orthovanadate和leupeptin等多种抑制剂,可以有效抑制蛋白降解,并能维持原有的蛋白间的相互作用。裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP和Co-IP等实验。
注意事项
1)需自备PMSF。
2)裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3) 用WB/IP裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度(SY0298)。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
(一) 细胞样品
1)融解WB/IP裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
2)贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液清洗细胞一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成5×105~1×106个细胞/管,然后再裂解。因为大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。
3)充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入100μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150μl或200μl。
(二)组织样品:
1)把组织剪切成细小的碎片。
2)融解WB/IP裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
3)按照每20mg组织加入100-200μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
4)用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5)充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
6)如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得充分。
储存条件:-20℃,避免反复冻融,有效期12个月。
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·R-藻红蛋白标记山羊抗兔IgG(H+L)F(ab)2片段
编号:SY0676
英文名称:R-Phycoerythrin AffiniPure F(ab)2 fragment Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)
规格:100μl
本品是由R-藻红蛋白标记的山羊抗兔IgG(H+L)F(ab)2片段,是将山羊抗血清经胃蛋白酶消化并使用抗原偶联的琼脂糖微珠亲和色谱纯化所得,借此可去除Fc片段和完整IgG分子。免疫电泳和/或ELISA法检测显示本品特异性结合完整的兔IgG分子,也会与其他兔免疫球蛋白的轻链结合。本品预先与相近物种包括人、小鼠、大鼠的血清蛋白经过亲和吸附处理,ELISA和/或固相免疫吸附检测证实本品与以上物种几乎无交叉反应。但可能会与其他物种免疫球蛋白发生交叉反应。本品不会与非免疫球蛋白类的血清蛋白发生交叉反应。R-藻红蛋白的Amax(最大激发波长)为490nm,545nm,566nm,Emax(最大发射波长)为580nm。本品可做多标实验,应用于流式细胞术(FC)等实验。
藻胆(色素)蛋白浓度:0.5mg/ml
缓冲液:0.01M 磷酸钠,0.25M 氯化钠, pH 7.6
稳定剂:15mg/ml BSA(无IgG,蛋白酶)
荧光素:Phycoerythrin Amax=490nm,545nm,566nm;Emax=580nm
防腐剂:0.05% 叠氮化*(代"钠")
推荐稀释比例:1:50~200(适用于大多数应用)
储存条件:-20℃,避免反复冻融,有效期一年。
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