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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
157
- 英文名:
Enterokinase, Recombinant, Expressed in E.coli
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
100U
特别提示:包括大肠杆菌表达重组肠激酶(不带标签)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:大肠杆菌表达重组肠激酶(不带标签)
英文名称:Enterokinase, Recombinant, Expressed in E.coli
产品货号:SY0369
产品规格:100U
重组肠激酶(rEK)是高纯度的牛肠激酶轻链亚基,它有着和天然提取的肠激酶同样特异的切割酶活性,切割位点AspAspAspAspLys,可去除位于蛋白N-末端的融合蛋白,以除去不需要的融合标签,本rEK具有比天然酶更高的切割活性。
本品为采用重组大肠杆菌分泌表达的高纯度、高活性、高特异的牛肠激酶,适用范围广,并且在各种去垢剂和变性剂存在的条件下仍具有部分活性。本品不含标签,由于具有极高酶切活性,酶切反应使用量少,不影响下游蛋白应用,故后续不需将其去除。
储存条件:-20℃,避免反复冻融,有效期一年。
来源:E. Coli
分子量:25.850 kDa
外观:无菌液体
酶浓度):10000U/ml,相当于10U/ul
活性定义:一个活性单位定义为25 ℃,12~16h,在25mM Tris-HCl,pH8.缓冲体系下,将500μg带有肠激酶酶切位点的融合蛋白切开95%所需要的酶量。
内毒素检测:用LAL法测定内毒素含量小于1EU/μg
质量保证:经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带;本制品中不含有非特异性的蛋白酶切活性。
常见影响肠激酶活性的因素:>2M 尿素,>200mM NaCl,>20mM β-ME,>0.1% SDS,>50mM 咪唑,或>5% 甘油
【注】:如果样品溶液中含有上述成分的一种或多种,为获得理想的酶切结果,请先将样品透析到25mM Tris-HCl 8.0缓冲液中,然后再进行酶切实验;若不方便透析,可将样品稀释,使得各组分低于干扰浓度后再酶切,酶的用量与蛋白比例不变;若干扰因素很多,且不便去除,需要适当增加酶量或延长酶切时间,有助于得到理想的酶切效果。
1)反应体系(1000μl)
融合蛋白———0.5-1mg(蛋白浓度:0.1-1mg/ml)
Enterokinase——————————————1-2U
10×rEK Reaction Buffer————————100μl
补DDW(超纯水)——————————To 1000μl
2)反应条件: 25 ℃过夜酶切(注:完全酶切需要16-24h)。
【注】该酶效力高且待切蛋白结构性质不同,建议先进行预实验摸索酶使用浓度及酶切反应时间。
【注】重组肠激酶可使用25mM Tris-Hcl pH8.0稀释成每1μl含0.1单位的溶液使用。
特别注意事项
1)磷酸盐对Enterokinase有很强的抑制作用,痕量的磷酸盐都会严重影响Enterokinase的活性,因此在酶切体系内不能存在磷酸盐。
2)本品是具有高酶活力重组肠激酶,切割蛋白使用量少,可不考虑除去。
3)蛋白酶切效果不好,可适当增加酶量,或适当延长酶切时间。
4)本品仅作科研用途!为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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