- ¥800 - 1380
- HZbscience
- 中国/美国/德国
- HZ0040
- 2025年07月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
半年
- 英文名：
pET-42b
- 库存：
200
- 供应商：
沪震生物
- 规格：
5ug
pET-42b
产品信息
| 产品货号 | 产品名称 | 产品规格 | 优惠价 |
|---|---|---|---|
| HZ0040 | pET-42b | 20μl |
¥请询价 |
使用说明
基本信息
| 启动子: | T7/lac |
|---|---|
| 复制子: | ColE1 ori，F1 ori |
| 终止子: | T7 terminator |
| 质粒分类: | 大肠杆菌载体；PET系列表达质粒 |
| 质粒大小: | 5929bp |
| 质粒标签: | N-GST, N-6×His, N-S, C-6×His, N-Thrombin, N-Factor Xa |
| 原核抗性: | 卡那霉素Kan |
| 克隆菌株: | DH5α |
| 培养条件: | 37℃，有氧，LB |
| 表达宿主: | BL21(DE3) |
| 诱导方式: | IPTG或乳糖及其类似物 |
| 5'测序引物: | T7:TAATACGACTCACTATAGGG |
| 3'测序引物: | T7-ter:TGCTAGTTATTGCTCAGCGG |
质粒简介
pET42a载体的单一的多克隆位点见上面的环状质粒图谱。注意：载体序列是以pBR322质粒的编码规矩进行编码的，所以T7蛋白表达区在质粒图谱上面是反向的。T7 RNA聚合酶启动的克隆和表达区域在质粒图谱中也被标注了出来。质粒的F1复制子是被定向的，所以在T7噬菌体聚合酶的作用下，包含有蛋白编码序列的病毒 粒子能够产生，并启动蛋白表达，同时蛋白表达将被T7终止子序列的作用下终止蛋白翻译。
把表达的基因插入到载体的PshAI限制性内切酶位点时，可以通过Factor Xa蛋白酶将融合表达的GST标签完全切除。
质粒图谱
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文献和实验加热灭活酶。通过凝胶提取试剂盒纯化消化的pET-32α（+）载体骨架和从pMD18-T载体切下的基因片段。用T4 DNA连接酶在23℃下用pET-32α（+）载体骨架连接基因片段1小时，载体末端和插入末端的比例为1：3（fmol）。将10μl连接反应与100μl感受态大肠杆菌 BL21（DE3）在冰上混合10分钟，并将混合物在42℃下孵育90秒。加入800μlLB并在37°C下孵育40分钟。涂在含有100μg/ ml氨苄青霉素的LB平板上。在37°C孵育过夜。通过菌落PCR筛选插入物的存在或制备
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