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- HZbscience
- 中国/美国/德国
- HZ0025
- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
半年
- 英文名：
pET28a-DsRed2
- 库存：
200
- 供应商：
沪震生物
- 规格：
5ug
pET28a-DsRed2
产品信息
| 产品货号 | 产品名称 | 产品规格 | 优惠价 |
|---|---|---|---|
| HZ0025 | pET28a-DsRed2 | 5μg |
¥请询价 |
使用说明
基本信息
| 启动子: | T7/lac |
|---|---|
| 复制子: | ColE1 ori，F1 ori |
| 终止子: | T7 terminator |
| 质粒分类: | 大肠杆菌质粒；大肠荧光质粒；大肠红色质粒 |
| 质粒大小: | 6025bp |
| 质粒标签: | N-6×His, N-Thrombin, N-T7,N-DsRed2, C-6×His |
| 原核抗性: | 卡那霉素Kan（50μg/ml） |
| 克隆菌株: | DH5α等大肠杆菌 |
| 培养条件: | 37℃，有氧，LB |
| 表达宿主: | BL21(DE3)等大肠杆菌 |
| 诱导方式: | IPTG或乳糖及其类似物 |
| 5'测序引物: | T7（TAATACGACTCACTATAGGG） |
| 3'测序引物: | T7-ter（TGCTAGTTATTGCTCAGCGG） |
质粒简介
pET系统是有史以来在大肠杆菌中表达重组蛋白的功能最强大的系统，也是现今原核表达方面使用最广泛的系统。该系列质粒能很容易的通过降低诱导物的浓度来削弱蛋白表达。在非诱导条件下，可以使目的基因处于完全沉默状态而不转录。
质粒图谱
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文献和实验dmdfe 本人将GFP基因后面加了一段大约110bp的序列，插入PET28A的BamH1和Hind3位点，最后在BL21中表达。 经SDS-PAGE验证表明： 目的蛋白 大量存在菌体裂解后沉淀即包涵体中，但是该沉淀无色。 少量存在于上清中，上清显微弱的绿色。 看文献大量报道GFP融合蛋白几乎都形成可溶性表达，目的蛋白在上清中，并且诱导条件没有太大要求。 想请教一下各位做过GFP原核表达的经验
表达His和sumo标签蛋白 pET28a+EGFP 大肠杆菌质粒 Kan 绿色荧光原核载体，0.1mM TPTG，20度诱导过夜 pET28a+DsRed2 大肠杆菌质粒 Kan 红色荧光原核载体，0.1mM TPTG，20度诱导过夜 pET28a+EYFP
蛋白。由于IPTG不会被宿主菌利用，因此向培养液中加入少量的IPTG 就能lacUV5强启动子产生持久的诱导作用。 2.材料与方法 1）.Taq DNA聚合酶表达载体构建 Nde1,Sal1双酶切通过pcr引进此双酶切位点taq酶基因，经过T4连接酶连接，将长度为2496bp的 taq聚合酶基因，插入同样双酶切的PET28a载体中。 2）.工程菌的转化 通过热击转化的方法，将连接产物转化BL21(DE3)表达菌株，通过菌落pcr,提取质粒酶切鉴定确认taq酶基因已经确实插入PET28a载体，送
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