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文献和实验1、将重组质粒（BL21-2ß2或Rossatta-2ß2）的表达菌37℃摇培过夜后，1：20扩配（约需1h15m）；2、至OD600=0.5~0.7时（约1h15min~1h45min），在15-（0.5-24，0.8-12）；20-（0.5-12，0.8-8）；28、25-（0.8-8）进行蛋白诱导表达，具体条件根据摇床使用情况而定；3、对诱导后的菌液4℃，4000g，20min，彻底去上清；离心前取2ml以备用于总蛋白电泳分析S1；4、细菌沉淀用BindingBuffer（无尿素，20
C左右，然后加入碘乙酰胺。通常我们在100 μl样品中加入10 μl 20%(w/v)的碘乙酰胺水溶液，并在室温下孵育30分钟。 通过这一步，我们可以获得更为锐利的条带，并排除了一些假象，如两条带、其他的高分子量条带、点样孔中的沉淀，以及凝胶上的线。 4. SDS电泳中运行缓冲液的滴定 到目前为止，大部分单向和双向SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的应用是在基于Lämmli的不连续缓冲液系统中开展的[1]。其他基于磷酸盐、咪唑或其他缓冲液的均一系统表现
实验步骤 1. 抗Fab片段抗体亲和层析纯化法 1) 偶联抗人或抗鼠Fab片段抗体到Protein G Sepharose，将纯化的抗人或鼠Fab片段抗体以2mg/ml的比例与Protein G Sepharose凝胶珠溶液混合，室温旋转孵育1h。用10倍量的0.2mol/L硼酸钠(pH值9.0)洗两次，4 000r/min离心5min，用10倍量的0.2mol/L pH值9.0硼酸钠溶液，重悬凝胶珠子，加入足够量的DMP
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