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MicroRNA的过表达、下调及检测

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      上海沪震生物科技有限公司

    MicroRNA的过表达、下调及检测

    服务简介:

    MicroRNA (miRNA) 是一类内生的、长度约为20-24个核苷酸的小RNA,其在细胞内具有多种重要的调节作用。每个miRNA可以有多个靶基因,而几个miRNA也可以调节同一个基因。这种复杂的调节网络既可以通过一个miRNA来调控多个基因的表达,也可以通过几个miRNA的组合来精细调控某个基因的表达。据推测,miRNA调节着人类二分之一的基因。

    一、MicroRNA的过表达

    MicroRNA存在多种形式,最原始的是pri-miRNA ,长度大约为300-1000个碱基pri-miRNA经过一次加工后,成为pre-miRNA 即microRNA前体,长度大约为70-90个碱基;pre-miRNA再经过Dicer酶酶切后,成为长约20-24nt的成熟miRNA 。

    实际研究中,pre-miRNA应用最早,也最广泛,目前很多商业化的MicroRNA库都是pre-miRNA形式的。近几年来,研究发现microRNA的双臂对成熟miRNA的形成有着十分重要的作用,所以天然的pri-miRNA形式越来越多地被研究者采用。

    既拥有pre-miRNA库,也拥有pri-miRNA库,大部分的pre-miRNA或pri-miRNA都已构建至表达载体上,您可以直接购买使用。

    TIPS : pri-miRNA过表达,miRNA能够提升多少?
    1. 如果目的细胞中已有目的miRNA的高表达:大约提升2-5倍;
    2. 如果目的细胞中目的miRNA低表达或无表达:大约提升到50-1000倍。

    二、MicroRNA的下调

    可以提供化学合成的miRNA inhibitors ,用于下调目的细胞中的miRNA ,以实现loss-of function研究。

    如果您需要进行长期、稳定的miRNA下调,则可以选用构建的载体形式的miRNA inhibitor。其转染效率高,下调效果好,可以实现对目的miRNA的长期、稳定的下调。

    载体形式的miRNA inhibitor,采用的是miRNA sponge法,这也是目前SCI文献中用的较多的一种方法。

    图2.7 miRNAsponge原理示意图

    三、MicroRNA的检测

    针对目前所有己在mirBase数据库中登录的miRNA,均可提供miRNAqPCR检测引物套装(miRNA qPCR Detection Primer Set) ,一套只需要500元(包括U6内参引物) 。

    的miRNAqPCR 检测引物,采用的是Stem-loop法。这种方法是目前最常用, SCI文献采用率最高的一种方法,ABI 、Ambion等公司的相关产品使用的也是这种方法。

    图2.8 miRNAqPCR检测 (Stem-loop法) 原理示意图

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