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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
4度保存和运输
- 保质期:
1年
- 库存:
大量
- 供应商:
上海沪震生物科技有限公司
- 规格:
盒
ECL检测试剂盒
ECL检测试剂盒是新一代的增强型化学发光底物试剂,它与生物分子上耦连的辣根过氧化物酶发生化学反应,发出荧光,从而可以通过用X光片压片或其它适当荧光成像设备检测样品,特别适用于痕量蛋白或核酸等生物大分子的检测。产品特点:
高效:本产品采用新一代发光增强剂,极大的增加了发光强度、延长发光时间。
应用广泛:本产品背景很低,对PVDF膜和硝酸纤维素膜均适用。
快速:预先配置混合液,室温孵育1-2分钟,即可进行检测。
保存条件:
· 4℃密封避光保存有效期一年以上。
· 25℃室温放置数月不影响质量。
· 如果长期不用,可以-20℃保存。-20℃可以保存更长时间。
操作流程:
1.试剂盒中Reagent A、Reagent B分装,使用时按1:1混合即为工作液,二抗孵育后,进行最后一次洗涤时,根据膜的大小,按每10cm2膜1ml工作液的量加入工作液。
2.用平头镊子将膜取出,膜的下缘轻轻接触吸水纸,以去除膜上多余的液体。膜的蛋白面朝上,置于洁净保鲜膜(某些市售保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜)上。用吸管将配制的发光检测液转移到蛋白膜上,使其均匀覆盖,室温孵育1-2分钟。
3.用平头镊夹持蛋白膜,膜的下缘轻轻接触吸水纸,以去除膜上多余的液体。膜的蛋白面朝上,包裹于洁净保鲜膜内,进行压片检测或者荧光成像仪检测。
4.压片检测: 轻轻赶出其间的气泡,将膜固定在X片暗盒内。在暗室中取一张X片置于包裹的膜上,合上暗盒,曝光30秒至1分钟。立即显影定影,根据其曝光强度,缩短或延长下一张X片的曝光时间(对微弱信号,曝光时间可延长至数小时),或者曝光0.5,1,2,4,6min一系列后再显影定影挑选一张满意的。
5.荧光成像仪检测:将膜放在荧光成像仪内,进行荧光检测直接记录蛋白膜的化学发光图像。
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文献和实验(All steps with agitation, unless done O/N at 4℃)►Rinse membrane once in TBS-T►Block the membrane with TBS-T/ 5% milk (or HIHS) for 30 min room►temp (can be left at 4℃ O/N here)►Rinse membrane briefly 2X with TBS-T and then once for 10 min with TBS
一、反应曲线 首先,我们了解一下化学反应的时间与吸光度一个曲线图,可以划分为四个区:延迟区、等速区、过渡区和平衡区,如下图所示: 二、反应原理 对于延迟区来讲,无规律可寻,对于指标检测没有意义。 等速区对应的指标检测方法是速率法。速率法又称连续监测法,是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时,连续选取时间-吸光度曲线中线性期内4个以上测光点作为读数点,并以单位时间吸光度变化值计算结果。线性期就是此期间内各测光点之间的吸光度差值相等,此线性期对酶促反应的底物来说属于零级反应。其测光点一般设置在加入
Western blotting using ECL reagent
REAGENTSECL Western blotting kit (Amersham Life Science; cat# RPN2108): contains second antibodies for both mouse and rabbit, substrate and milk blocker (the milk blocker is not normally used when using ruminant samples).Hybond ECL nitrocellulose
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