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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
6个月
- 英文名:
EPSPS gene nucleic acid assay kit for transgenic soybean (PCR- fluorescent probe)
- 库存:
10
- 供应商:
沪震生物
【包装规格】24/50/96测试/盒
【类别】PCR-荧光试剂盒
【运输】低温、避光、快递免费送货上门。
【用途】生化实验,合成实验等试验。
转基因大豆EPSPS基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)常见问题:
一.没有扩增产物
1.循环温度:变性温度、退火温度
2.引物设计
3.DNA聚合酶活性
4.抑制性成份(蛋白酶、核酸酶、其它抑制聚合 酶活性的成份)
5、DNA样品
二.非特异产物及电泳呈涂布状
1.Mg2 浓度
2.调整引物、模板、聚合酶的用量
3.适当减少循环数
4.适当提高退火温度,缩短退火或延伸时间
转基因大豆EPSPS基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)的改进与完善:
Mullis最初使用的DNA聚合酶是大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow片段,其缺点是:
①Klenow酶不耐高温,90℃会变性失活,每次循环都要重新加,每加入一次酶只能完成一个扩增反应周期,给PCR技术操作程序添了不少困难。
②引物链延伸反应在37℃下进行,容易发生模板和引物之间的碱基错配,其PCR产物特异性较差,合成的DNA片段不均一。
2)1988年初,Keohanog改用T4 DNA聚合酶进行PCR,其扩增的DNA片段很均一,真实性也较高,只有所期望的一种DNA片段。但每循环一次,仍需加入新酶。
3)1988年Saiki 等从温泉中分离的一株水生嗜热杆菌(thermus aquaticus) 中提取到一种耐热DNA聚合酶。转基因大豆EPSPS基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)此酶具有以下特点:
①耐高温,在70℃下反应2h后其残留活性大于原来的90%,在93℃下反应2h后其残留活性是原来的60%,在95℃下反应2h后其残留活性是原来的40%。
②在热变性时不会被钝化,不必在每次扩增反应后再加新酶。
③大大提高了扩增片段特异性和扩增效率,增加了扩增长度(2.0Kb)。由于提高了扩增的特异性和效率,因而其灵敏性也大大提高。为与大肠杆菌多聚酶I Klenow片段区别,将此酶命名为Taq DNA多聚酶(Taq DNA Polymerase)。此酶的发现使PCR广泛的被应用。
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文献和实验大多是采用琼脂糖凝胶电泳法,首先检测CAMV-35S启动子和NOS终止子进行筛选,然后检测EPSPS抗草甘膦基因,操作烦琐、费时。本研究利用双重PCR技术同时扩增上述基因片段,用激光诱导荧光-毛细管电泳高效、快速检测PCR产物,显著提高了检测效率,并使灵敏度大为增加。本方法所需样品量少(nl级),快速、灵敏和准确,已成功用于实际转基因大豆样品的分析。1 材料和方法1.1 仪器与试剂毛细管电泳-激光诱导荧光检测装置(自行组装),其中氦氖激光器(543.5nm,JDS Uniphase,USA)参数
一种基于手动芯片点样仪的快捷高效的转基因植物PCR-dot-blot鉴定法
为探针进行杂交,所得X光片成像结果如图2右侧所示。成像斑点清晰,三张重复膜的结果一致,被检转基因植株全为阳性,阴性对照处未检出杂交信号,阳性对照明显。 3、讨论 PCR的方法用于检测转基因植物非常简便,但是其高灵敏度的特点容易导致假阳性结果,须经PCR产物克隆测序最终确认,如果用于鉴定大批量的转基因植物将会相当的费时费力。为此我们借助芯片点样仪样品量少、操作方便、重复性好等优点,采用快速、安全的生物素标记探针杂交法对转基因植物的PCR产物进行鉴定。为保证结果的真实性,一方面将PCR
PCR-SSCP法是在非这性聚丙烯酰胺凝胶上,短的单链DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同构象,一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变。其基本原理为单链DNA在中性条件下会形成二级结构,这种二级结构依赖于其碱基组成,即使一个碱基的不同,也会形成不同的二级结构而出刺同的迁移率。由于该法简单快速,因而被广泛用于未知基因突变的检测。用PCR-SSCP法检测小于200bp的PCR产物时,突变检出率可达70%-95%,片段大于400bp时,检出率仅为50%左右,该法可能
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