碱性磷酸酶(来源于大肠杆菌)

碱性磷酸酶(来源于大肠杆菌)

英文名：Alkaline Phosphatase
规格：200U
本品是一种热敏感的，可以催化DNA、RNA、核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸水解释放5′或3′末端磷酸基团的酶，也可以脱去蛋白质丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基上的磷酸基团。本酶是一种新型碱性磷酸酯酶，在我司的多种内切酶和PCR缓冲液中可保持100%活性，对于各种类型的DNA 5′末端的去磷酸化均可在37℃孵育10分钟即可完成，并且75℃孵育5分钟即可完全失活。

碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase, AP/ALP/AKP/ALKP/ALPase/Alk Phos)常被称作碱性磷酸酯酶(EC 3.1.3.1)，是一类水解酶，通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去，并生成磷酸根离子和自由的羟基，其去磷酸化作用的底物包括核苷酸、蛋白质和生物碱等，并在碱性条件下最为有效。该酶是一组同功酶的统称。

经限制性内切酶酶切的质粒5′端带有磷酸基团，在进行基因克隆时为避免质粒自连，可以使用本酶去除5′末端磷酸基团。脱去5′末端磷酸基团的质粒不能发生自连。

特点：快速去磷酸化，只需37℃孵育10分钟即可；快速失活，75℃孵育5分钟即可完全失活；使用方便，在各种内切酶和PCR缓冲液中保持100%活性，可以和质粒DNA的消化同时进行；操作步骤简单，对于5′或3′突出末端、平端等各种DNA的脱磷酸化采用完全相同的操作步骤；可直接用于连接反应，经本酶脱磷，并75℃孵育5分钟失活后可直接用于后续的连接反应。

用途：通过去除载体或DNA*(代"片")段5′末端的磷酸基团，防止载体或DNA*(代"片")段自连；质粒DNA的同时内切酶消化和脱磷；通过5′末端脱磷，为5′末端磷酸化放射性标记准备模板；去除DNA、RNA 5′或3′末端的磷酸基团；用于蛋白质丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸残基的去磷酸化。

来源：大肠杆菌表达，表达基因为一种细菌碱性磷酸酯酶基因。

酶活性定义：37℃10分钟内，催化1μg 线性化的pUC19 DNA5′末端脱磷所需的酶量定义为一个活力单位。

纯度：不含DNA外切酶和内切酶，不含RNA酶。

酶储存溶液：20mM HEPES-NaOH(pH7.4)，1mM MgCl2，0.1mM ZnCl2，0.1% Triton X-100，50%(v/v)glycerol。

Reaction Buffer(10X)：100mM Tris-HCl(pH8.0 at 37℃)，50mM MgCl2，1M KCl，0.2% Triton X-100，10mM 2-mercaptoethanol，1mg/ml BSA。

失活或抑制：75℃加热5分钟可以使本酶失活。金属离子螯合剂对本酶有抑制作用。

储存条件：-20℃