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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
6个月
- 英文名:
Feline Chlamydia trachomatis (CP) nucleic acid assay kit (PCR)
- 库存:
10
- 供应商:
沪震生物
- 规格:
次
【包装规格】24/50/96测试/盒
【类别】PCR-荧光试剂盒
【运输】低温、避光、快递免费送货上门。
【用途】生化实验,合成实验等试验。
猫衣原体(CP)核酸检测试剂盒(PCR法)常见问题:
一.没有扩增产物
1.循环温度:变性温度、退火温度
2.引物设计
3.DNA聚合酶活性
4.抑制性成份(蛋白酶、核酸酶、其它抑制聚合 酶活性的成份)
5、DNA样品
二.非特异产物及电泳呈涂布状
1.Mg2 浓度
2.调整引物、模板、聚合酶的用量
3.适当减少循环数
4.适当提高退火温度,缩短退火或延伸时间
猫衣原体(CP)核酸检测试剂盒(PCR法)的改进与完善:
Mullis最初使用的DNA聚合酶是大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow片段,其缺点是:
①Klenow酶不耐高温,90℃会变性失活,每次循环都要重新加,每加入一次酶只能完成一个扩增反应周期,给PCR技术操作程序添了不少困难。
②引物链延伸反应在37℃下进行,容易发生模板和引物之间的碱基错配,其PCR产物特异性较差,合成的DNA片段不均一。
2)1988年初,Keohanog改用T4 DNA聚合酶进行PCR,其扩增的DNA片段很均一,真实性也较高,只有所期望的一种DNA片段。但每循环一次,仍需加入新酶。
3)1988年Saiki 等从温泉中分离的一株水生嗜热杆菌(thermus aquaticus) 中提取到一种耐热DNA聚合酶。猫衣原体(CP)核酸检测试剂盒(PCR法)此酶具有以下特点:
①耐高温,在70℃下反应2h后其残留活性大于原来的90%,在93℃下反应2h后其残留活性是原来的60%,在95℃下反应2h后其残留活性是原来的40%。
②在热变性时不会被钝化,不必在每次扩增反应后再加新酶。
③大大提高了扩增片段特异性和扩增效率,增加了扩增长度(2.0Kb)。由于提高了扩增的特异性和效率,因而其灵敏性也大大提高。为与大肠杆菌多聚酶I Klenow片段区别,将此酶命名为Taq DNA多聚酶(Taq DNA Polymerase)。此酶的发现使PCR广泛的被应用。
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文献和实验研究表明,TWAR在肺炎的常见病因中居第3或第4位。支气管炎通常呈亚急性过程,症状持续数日或数周。TWAR还可引起咽炎或鼻窦炎,咽炎可伴有发热,鼻窦炎可同时有中耳炎。扁桃体炎和鼻窦炎也常伴发于TWAR肺炎或支气管炎。 TWAR抗体与慢性冠心病和急性心肌梗塞密切相关。近年来在冠状动脉和主动脉的硬化斑中,经用TWAR特异性单克隆抗体免疫组化染色和以PCR法检测TWAR DNA,均证实病灶中存在肺炎衣原体,而正常动脉组织中则阴性。同时,硬化的冠状动脉壁在电镜下还观察到大小和形态均与肺炎衣原相
衣原体 概述 衣原体(Chalmydiae)是一类在真核细胞内专营寄生生活的微生物。研究发现这类微生物具有和革兰氏阴性细菌很多相似。这些特性是:(1)有DNA和RNA两种类型的核酸;(2)具有独特的发育周期,类似细菌的二分裂方式繁殖;(3)具有粘肽组成的细胞壁;(4)含有核糖体;(5)具有独立的酶系统,能分解葡萄糖释放CO2,有些还能合成叶酸盐,但缺乏产生代谢能量的作用,必须依靠宿主细胞的代谢中间产物,因而表现严格的细胞内寄生;(6)对许多抗
沟淋巴肉芽肿病毒( psittacosislymphogranvlo-ma, virus, PLV)、鹦鹅热病毒群( Psittacosisvirus group)等,相当混乱。现在已按伯杰式分类法归为衣原体目( Chlamidiales, L.A.Pagei等, 1971)。然而目前尚有许多不明之处。侵染粒子呈直径 0.3微米的球形,可用光学显微镜看到;在被细胞壁和细胞膜包裹的细胞质中有核糖体;核酸同时含有 DNA和 RNA;已证明有葡萄糖代谢活性和蛋白质合成能力;在细胞液胞内增殖,不进入细胞质质内。侵染粒子通过吞噬作用进入细胞波胞内,转化成一般称为网状
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