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- KALANG
- 中国大陆
- KL-D6244
- 2025年07月16日
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- 技术资料
- 保存条件：
2～8℃
- 保质期：
长期
- 英文名：
Bisulfite DNA Modification Kit
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
50次
亚硫酸氢盐DNA修饰试剂盒
英文名：Bisulfite DNA Modification Kit规格：50次
产品简介:
亚硫酸氢盐使DNA样品中的非甲基化的胞嘧啶C发生脱氨基反应变成尿嘧啶U,而甲基化的胞嘧啶不能发生脱氨基反应,碱基不发生转变。发生了C到U转化的DNA样品就可以用于后续的甲基化PCR或其他方法检测出来。
本产品是经典亚硫酸氢盐修饰和本公司专门开发的柱式单链DNA回收产品的结合,具有下列特点:
1.即开即用,免去单独购买和制备试剂的繁琐。
2.反应专一,可高效转化非甲基化C成U,转化率达99%。
3.专门的柱式单链DNA回收技术,使最终回收效率高达50%。
4.每次处理量在500 pg-5μg之间(最适处理量在2μg),尤其适用于微量样品及石蜡切片样品。
5.与多种后续反应兼容,如WGA(全基因组扩增)、PCR扩增、限制性内切酶消化、测序和微阵列分析等。
使用及效果:
将5 μL预配溶液A加入到45 μL的DNA溶液中,37℃放置15分钟,立即加入500 μL溶液B,轻柔颠倒混匀。55℃避光保温8-16小时后冰浴10分钟。加入1 mL通用溶胶液,颠倒混匀后上柱,12,000 rpm离心半分钟,加入0.7 mL通用洗柱液,12,000 rpm离心半分钟。加入50 μL溶液A稀释液,室温放置2分钟离心半分钟。37℃放置15分钟。加入0.7 mL通用溶胶液,混匀后上柱,12,000 rpm离心半分钟。加入50 μL DNA洗脱液,室温放置2分钟后离心半分钟,即可以得到亚硫酸氢盐修饰的DNA。
运输及保存:
常温,保存期为一年。
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文献和实验[原创]亚硫酸氢盐修饰DNA步骤<<DNA methylation>>译稿
亚硫酸氢盐修饰DNA步骤 一、内切酶作用体系：（自建立，试过，效果很好） EcoRⅠ TaKaRa 消化DNA 37℃ 3h ddH2O 11ul H溶液 2ul EcoRⅠ 1ul DNA 6ul 37℃ 孵育 3h 二、亚硫酸氢盐修饰过程：（翻译稿） 1. 用适合的内切酶消化大分子量的DNA（避免目的基因被切割），或者通过把DNA悬于蛋白酶k/SDS缓冲液，通过26 gauge needle 5次，37℃孵育30min（降低DNA大小，利于充分变性） 2. 加2.2
的后果是不仅没有RNA，连DNA也被消化了。两者均于-20℃保存。验证提取DNA的纯度的方法有二：1、紫外分光光度计计算OD比值；2、1%-1.5%的琼脂糖凝胶电泳。第二种方法优于第一种方法，这种方法完全可以明确所提基因组DNA的纯度，并根据Marker的上样量估计其浓度，以用于下一步的修饰。第二部分 亚硫酸氢钠修饰基因组DNA如不特别指出，所用双蒸水（ddH2O）均经高压蒸汽灭菌。1、将约2μgDNA于1.5mlEP管中使用ddH2O稀释至50μl；2、加5.5ul新鲜配制的3M NaOH
第三部分 修饰后DNA纯化回收 EP管如无特别说明均为高压蒸汽灭菌的。 1. 将移液器枪头伸入石蜡油层下，先轻轻加压使其中一小段石蜡油排出，然后吸取混合液至一洁净1.5mlEP管中。 2：以下使用Promega Wizard Cleanup DNA纯化回收系统（Promega，A7280） 1）70℃水浴预热DDW；配制80%异丙醇； 2）加1ml Promega’s Wizard DNA Clean-up resin，轻柔颠倒混匀，使DNA充分与树脂结合；
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