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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
6个月
- 英文名:
Avian nucleic acid detection kit (ATB) (PCR-)
- 库存:
10
- 供应商:
沪震生物
- 规格:
次
【包装规格】24/50/96测试/盒
【类别】PCR-荧光试剂盒
【运输】低温、避光、快递免费送货上门。
【用途】生化实验,合成实验等试验。
鸡肠炎沙门氏菌(SPP.E)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)常见问题:
一.没有扩增产物
1.循环温度:变性温度、退火温度
2.引物设计
3.DNA聚合酶活性
4.抑制性成份(蛋白酶、核酸酶、其它抑制聚合 酶活性的成份)
5、DNA样品
二.非特异产物及电泳呈涂布状
1.Mg2 浓度
2.调整引物、模板、聚合酶的用量
3.适当减少循环数
4.适当提高退火温度,缩短退火或延伸时间
鸡肠炎沙门氏菌(SPP.E)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)的改进与完善:
Mullis最初使用的DNA聚合酶是大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow片段,其缺点是:
①Klenow酶不耐高温,90℃会变性失活,每次循环都要重新加,每加入一次酶只能完成一个扩增反应周期,给PCR技术操作程序添了不少困难。
②引物链延伸反应在37℃下进行,容易发生模板和引物之间的碱基错配,其PCR产物特异性较差,合成的DNA片段不均一。
2)1988年初,Keohanog改用T4 DNA聚合酶进行PCR,其扩增的DNA片段很均一,真实性也较高,只有所期望的一种DNA片段。但每循环一次,仍需加入新酶。
3)1988年Saiki 等从温泉中分离的一株水生嗜热杆菌(thermus aquaticus) 中提取到一种耐热DNA聚合酶。鸡肠炎沙门氏菌(SPP.E)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)此酶具有以下特点:
①耐高温,在70℃下反应2h后其残留活性大于原来的90%,在93℃下反应2h后其残留活性是原来的60%,在95℃下反应2h后其残留活性是原来的40%。
②在热变性时不会被钝化,不必在每次扩增反应后再加新酶。
③大大提高了扩增片段特异性和扩增效率,增加了扩增长度(2.0Kb)。由于提高了扩增的特异性和效率,因而其灵敏性也大大提高。为与大肠杆菌多聚酶I Klenow片段区别,将此酶命名为Taq DNA多聚酶(Taq DNA Polymerase)。此酶的发现使PCR广泛的被应用。
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文献和实验液定影 5min 流动水冲洗 15min 所有使用液的温度应为18~20OC为宜。 三、注意事项 ⒈ 核酸片段的大小: 用于SSCP分析的核酸片段越小,检测的敏感性越高。对于 ⒉ 游离引物: 游离引物可能同 PCR产物结合而改变其泳动率,即使游离引物量为6nM都有明显影响。因此,应尽可能除去游离引物。可以采用不对称引物扩增方法,尽可能消耗多余的引物。也可以运用过柱或磁性球方法纯化PCR产物。或者是稀释PCR产物,减少游离引物的干扰。 ⒊ 低浓度变性剂: 凝胶中加入低浓度的变性剂,如5%
进行以确定实验的成功和效率: 在几个小时内,聚合酶链式反应或 PCR 将目标序列的一个拷贝放大到数百万份拷贝。在终点 PCR 之后进行电泳,以确认靶标的扩增及其产量。 在与限制酶反应以切割 DNA 底物上特定序列的限制消化反应后,在凝胶上运行的样品来确定 DNA 切割模式(以及消化完成的程度)。 在分子克隆中,通过称为 连接的过程将 DNA 片段插入载体中。在一些情况下,可以在连接后进行电泳以评估反应效率(图 2)。然后将连接产物用于转化克隆生物体的 感受态细胞,如 大肠杆菌繁殖,然后筛选形成
由许多核苷酸聚合而成的生物大分子化合物,为生命的最基本物质之一。最早由米歇尔于1868年在脓细胞中发现和分离出来。核酸广泛存在于所有动物、植物细胞、微生物内、生物体内核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。不同的核酸,其化学组成、核苷酸排列顺序等不同。根据化学组成不同,核酸可分为核糖核酸,简称RNA和脱氧核糖核酸,简称DNA。DNA是储存、复制和传递遗传信息的主要物质基础,RNA在蛋白质牲合成过程中起着重要作用,其中转移核糖核酸,简称tRNA,起着携带和转移活化氨基酸的作用;信使核糖核酸,简称
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