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- 文献和实验
- 技术资料
- 亚型:
IgG
- 形态:
液态/冻干粉
- 保存条件:
-20℃保存
- 克隆性:
多克隆
- 标记物:
FITC
- 宿主:
Rabbit
- 应用范围:
ELISA=1:500-1000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-4399 (石蜡切片需做抗原修复) not yet tested in other applications.
- 浓度:
3896mg/ml
- 抗体英文名:
CENPL
- 规格:
0.1ml 0.3901ml
【抗体的鉴定】
筛选杂交瘤细胞通过选择性培养而获得杂交细胞系中,仅少数能分泌针对免疫原的特异性抗体。一般在杂交瘤细胞布满孔底1/10面积时,即可开始检测特异性抗体,筛选出所需要的杂交瘤细胞系。
检测抗体的方法应根据抗原的性质、抗体的类型不同,选择不同的筛选方法,一般以快速、简便、特异、敏感的方法为原则。
【抗体溶解方法】
方法1:我们的抗体(冻干粉)已经包含了0.01M PBS、1% BSA和0.1% 防腐剂(叠氮钠或庆大霉素),您只需要加入灭菌的双蒸水就行了。抗体溶解后,置于-20℃保存,最好分装后使用,避免反复冻融,可保证至少1年有效;
方法2:也可以只加入一半体积的双蒸水,再用一半体积的甘油补足,置于-20℃保存,这样抗体不会冻,有利于抗体的稳定。
后续试验时,再使用对应的缓冲液稀释成工作液,即用即配。
我们的抗体(冻干粉),在常温放置下,至少一个月有效;若在-20℃下保存(推荐),至少三年有效。
Antibodies are prepared with 0.01M PBS, pH 7.4 with 1% BSA and 0.1% Sodium Azide, prior to lyophilization. Currently, we offer both lyophilized and reconstituted antibodies, both resulting in final concentration of 1mg/mL. We recommend two ways to reconstitute antibodies in lyophilized form:
1) Reconstituting by directly adding 100uL of sterile, distilled water.
2) Alternatively, if glycerol does not affect the experiment, add 50uL sterile distilled water, followed by adding 50uL of glycerol.
修复液:0.01M 枸橼酸(pH6.0)或者0.05M EDTA(pH8.0)
【抗体修复方法】
方法1:沸水浴修复,将盛有修复液和玻片的烧杯置于沸水浴环境,保持外部沸腾状态15min,自然冷却至室温;
方法2:微波修复,将盛有修复液和玻片的烧杯置于微波炉中,高火5min,停火3min,中火5min,自然冷却至室温。
DAB溶液配制:(组化及Western blot 显色)
称DAB 30mg,用0.05mol/L pH7.6 Trs-HCL缓冲液100ml溶解,如有沉淀,过滤后使用,一般新鲜配制使用;
使用前加入1% H2O2 1ml至1.5ml,H2O2浓度为0.01%,混均后使用。7、3′,3′,5′,5′,-四甲基联苯胺(TMB)
【溶液配制】
用二甲基甲酰胺(dimethylformamide,DMF)或无水乙醇,将TMB配成1%浓度,4°C保存半年以内使用;
使用前,用pH5.0磷酸-柠檬酸底物液9.9ml加入0.1ml(1mg/TMB)1% TMB溶液中,再按每毫升TMB加入30% H2O2 1ul,混匀后立即使用。2N H2SO4终止后,450nm测定OD值。
8、1%离子琼脂胶配制液
作免疫双相扩散,单相扩散及免疫电泳中使用。
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文献和实验二、 荧光原位杂交及其探针 1. 荧光原位杂交的原理 染色体荧光原位杂交始于传统的细胞遗传学和DNA技术的结合,这种结合开创了一门新的学科——分子细胞遗传学。其基础是Southern blot原理,以半抗原如生物素、地高辛间接标记或以荧光素直接标记的已知核酸分子为探针,探针和靶序列双链DNA变性后杂交,互补的异源单链DNA分子在适宜的温度和离子强度下退火形成稳定的异源双链DNA,通过荧光标记的亲和素或抗地高辛抗体将半抗原显示出来,通过荧光显微镜观察杂交
背景与目的:建立可以同时检测人精子染色体数目畸变和结构畸变的多色荧光原位杂交技术。材料与方法:使用2条1号染色体探针(着丝粒和末端探针),2条18号染色体着丝粒探针,分别用地高辛或生物素标记,与人精子核dna进行荧光原位杂交,用cy3-链亲和素检测生物素探针杂交信号;用与fitc结合的抗地高辛抗体检测地高辛信号,结果:在nikon荧光显微镜下,可以清楚看到精子头部呈现兰色的荧光信号背景下,有红色荧光点信号(1号染色体着丝粒),绿色荧光信号(1号染色体末端),和黄色荧光信号(18号染色体着丝粒
体(yeast artificial chromosome, YAC) YAC 的主要功能成份有三: 1)着丝粒:mitosis姊妹染色单体和减I同源染色体分离之必需。 2)端粒:保护染色体末端免受核酸酶的侵袭。 3)自主复制序列(ARS)元件:是染色体自主复制的复制起点。 构建YAC需要4个短序列:2个端粒,着丝粒,ARS元件,与外源DNA连接成线性DNA分子,导入酵母细胞克隆。 三、DNA重组与分子克隆化 为获得所需的基因或特异序列,需从细胞中分离得到目的基因与载体DNA重组,并用适当
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