膜锚定-海肾-萤火虫三荧光素酶（triple lucifer

荧光标记怎么选择？

表达，以此来进行选择最后的融合位置。 表 1. 常用荧光蛋白特性 荧光素酶 荧光素酶（Luciferase）是自然界中能够催化荧光素产生生物发光的酶的统称，其中主要有萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase，FLuc）和海肾荧光素酶（Renilla luciferase，RLuc）。荧光素酶报告系统非常灵敏，可以高效地检测基因的表达和细胞的活动情况，是分析转录因子与启动子活性、miRNA 与靶基因相互作用以及活体成像等的有效方法。 萤火虫荧光素酶（FLuc）：FLuc 的底物是荧光素，催化

双荧光素酶检测的原理和应用

一、荧光素酶报告基因的检测原理荧光素酶（Luciferase）是生物体内催化荧光素(luciferin)或脂肪醛(firefly aldehyde)氧化发光的一类酶的总称，来自于自然界能够发光的生物。自然界存在的荧光素酶来自萤火虫、发光细菌、发光海星、发光节虫、发光鱼、发光甲虫等。细菌荧光素酶对热敏感，因此在哺乳细胞的应用中受到限制。目前，以北美萤火虫虫(Photinus pyralis)来源的荧光素酶基因应用的最为广泛，该基因可编码550个氨基酸的荧光素酶蛋白，是一个61kDa的单体酶，无需

一文搞清蛋白质相互作用的研究方法

，并最终能够在激光的激发下发出绿色的荧光 ，如图 2 所示。这里的 GFP 也可以换成萤火虫荧光素酶 Luciferase，原理相同，不同的是荧光素酶需要有底物的存在，发出的是自发荧光而非激发光 。这类技术的好处是可以再活细胞里进行观测，可以进行实时监控，定量等实验。但是该技术的空间分辨率大概是 250nm，可以说对于蛋白质相互作用来说，依然是相当远的一个距离，因此也有很大可能是假阳性，同时融合蛋白也可能对受试蛋白的空间构象造成影响造成假阳性假阴性的结果。总的来说，这类技术还是要优于前两个的。图