KAPA 文库定量引物 (Ion Torrent)

KAPA文库定量试剂盒

传统DNA文库定量的标准流程耗费人力、时间，成本高，而单独采用常规定量的方法测量的是总的核算浓度，且灵敏度低、可信度差。最佳的簇密度或模板与磁珠的比率取决于合适的能进行PCR扩增的DNA分子的浓度，KAPA文库定量试剂盒正式通过高性能qPCR的方法对文库进行定量，减少簇密度或模板与磁珠比例的差异，同时减少传统标准流程的时间消耗、消除昂贵的滴定操作。

1、产品应用

　 能准确定量大于0.0002pM包含完整引物序列的文库

　能准确定量GC含量跨度大的文库

　能准确定量平均片段长度为1kb的文库

2、KAPA文库定量试剂盒流程

　　试剂盒包含：KAPA SYBR FAST qPCR、6个线性DNA标准品（10倍浓度稀释）、10×Primer Premix

1.将1ml的Primer Premix加入到5ml的KAPA SYBR FAST qPCR Master Mix(2x)中；

2.稀释dsDNA文库

用10mM Tris-HCI对文库进行1:1000倍稀释，如果需要可进行：1:2000,1:4000,1:8000稀释；

3.准备qPCR反应

20μl反应体系：12μl的KAPA SYBR FAST qPCR Master Mix（含Primer Premix）、4μl PCR水、4μl稀释的文库DNA或DNA标准品；

4.qPCR反应

起始变性5分钟，然后35个循环（95℃30秒、退火/延伸60℃45秒）；

5.数据分析

确认扩增效率位于90-110%之间；

6.计算文库浓度

根据说明书提供的公式推算绝对文库浓度；

7.根据计算所得的文库浓度推算未稀释的文库浓度，然后进行下一步实验。

3、产品优势

（1）qPCR文库定量简化工作流程

KAPA文库定量试剂盒消除了耗费时间且昂贵的滴定操作，提供了简化高通量流程的良好模式。

 

（2）可靠的文库定量能够使簇密度均一性好

（3）qPCR能有效扩增各种类型模板

传统qPCR试剂适用于短片段扩增，而对长片段、GC含量不均衡、复杂结构的片段扩增效率低，某些文库分子的定量不可靠。为了定量复杂DNA文库，KAPA特别改造了一种基于SYBR Green qPCR的酶，能有效扩增对野生型酶来说扩增困难的模板。KAPA文库定量试剂盒包含了该基因工程改造酶以确保能有效扩增长片段及GC含量跨度大的文库，对文库定量准确。

上图：qPCR扩增前后片段大小分布　扩增前（灰色区）和用3种商业化的qPCR mixes （KAPA SYBR Fast(蓝)，竞争试剂S（红），竞争试剂F（橙））扩增后的片段大小分布。对比试剂包含野生型Taq酶。反应按如下循环程序：95℃ 10min，40个循环95℃ 10sec 60℃ 45sec。

上图：稳定的扩增使不同文库qPCR定量准确KAPA文库定量试剂盒用于定量两个Illumina GA文库的浓度，这两个文库GC含量异常（Rhodococcus sp.～70%GC,如图，Staphylococcus sp.～35%GC未展示）。两个文库扩增效率均大于95%。样本连续两倍稀释（1:1000到1:16000），每个梯度3个重复，PCR反应参照产品使用说明书推荐参数。

可靠的DNA定量标准品，批次之间差异最小

上图：KAPA文库文库定量试剂盒的批次间差异（Roche Titanium系列平台） 通过分析3个不同批次（红、粉、蓝）产品的标准品的扩增图谱进行比较。每个点设置3个重复，并计算平均值。

上图：批次间及试剂盒间的差异最小　 使用不同批次和同一批次不同KAPA文库定量试剂盒（Illumina GA平台）对9个人源DNA文库和两个micro　DNA文库进行定量并比较定量结果。

4、二代测序文库定量产品信息

货号	产品	规格
KK4800	DNA Quant Kit Roche 454 FLX	6×80μl,1ml
KK4801	Primer Premix Roche 454 FLX	1ml
KK4802	DNA Quant Kit Roche 454 Titanium	6×80μl,1ml
KK4803	Primer Premix Roche 454 Titanium	1ml
KK4806	DNA Quant Kit ABI SOLiD	6×80μl,1ml
KK4807	Primer Premix ABI SOLiD	1ml
KK4808	DNA Quant Kit Illumina GA Revised Primers	6×80μl,1ml
KK4809	Primer Premix Illumina GA Revised Primers	1ml
KK4812	DNA Quant Kit-Ion Torrent	6×80μl,1ml
KK4813	DNA Quantification Primer Premix -Ion Torrent	1ml
KK4900	Library Quantification DNA Standards(454 FLX/Lib-A)	6×80μl
KK4902	Library Quantification DNA Standards(SOLiD)	6×80μl
KK4903	Library Quantification DNA Standards(Illumina)	6×80μl
KK4904	Library Quantification DNA Standards(Ion Torrent)	6×80μl
KK4820	Library Quant Kit,Roche 454 FLX-SYBR Fast Universal	500反应
KK4821	Library Quant Kit,Roche 454 Titanium-SYBR Fast Universal	500反应
KK4824	Library Quant Kit,Illumina GA revised primers-SYBR Fast Universal	500反应
KK4823	Library Quant Kit,ABI SOLiD-SYBR Fast Universal	500反应
KK4830	Library Quant Kit,Roche 454 FLX-SYBR Fast ABI Prism	500反应
KK4831	Library Quant Kit,Roche 454 Titanium-SYBR Fast ABI Prism	500反应
KK4835	Library Quant Kit,Illumina GA revised primers-SYBR Fast ABI Prism	500反应
KK4833	Library Quant Kit,ABI SOLiD-SYBR Fast ABI Prism	500反应
KK4840	Library Quant Kit,Roche 454 FLX-SYBR Fast Bio-Rad iCycler	500反应
KK4841	Library Quant Kit,Roche 454 Titanium-SYBR Fast Bio-Rad iCycler	500反应
KK4844	Library Quant Kit,Illumina GA revised primers-SYBR Fast Bio-Rad iCycler	500反应
KK4843	Library Quant Kit,ABI SOLiD-SYBR Fast Bio-Rad iCycler	500反应
KK4850	Library Quant Kit,Roche 454 FLX-SYBR Fast Roche Light Cycler480	500反应
KK4851	Library Quant Kit,Roche 454 Titanium-SYBR Fast Roche Light Cycler480	500反应
KK4854	Library Quant Kit,Illumina GA revised primers-SYBR Fast Roche Light Cycler480	500反应
KK4853	Library Quant Kit,ABI SOLiD-SYBR Fast Roche Light Cycler480	500反应
KK4834	Library Quant Kit,Illumina GA ABI Prism Custom Kit-Sanger	500反应
KK4827	Library Quant Kit,Ion Torrent PGM universal	500反应
KK4838	Library Quant Kit,Ion Torrent PGM ABI Prism	500反应
KK4847	Library Quant Kit,Ion Torrent PGM Bio-Rad iCycler	500反应
KK4857	Library Quant Kit,Ion Torrent PGM Roche Light Cycler480	500反应