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上海晶抗生物工程有限公司
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用途: TLC法鉴别
彩色预染marker(10-150kd),分析标准品,选购我司:
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文献和实验蛋白或者多肽的分离辨别。其中GE的从2kD到16kD之间有6条带的蛋白标准挺不错,另外提醒一句,特别小的蛋白Marker条带如果要显色好,上样一定要上足够的量哦。 二.预染蛋白分子量标准 预染蛋白分子量是一些纯化好的蛋白混合物,通过与染料共价耦联,在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。预染蛋白分子量的出现方便了我们的实验,这种蛋白分子量标准可以帮助我们在电泳时、电泳后,以及转膜后监测电泳情况和估计迁移率——比如,已知垂直电泳最佳分辨区域大约在胶的2/3处。如果使用预染Marker
分子量这么小,用的SDS-PAGE胶浓度大一点,15%,跑胶时间不用太长,看见溴酚蓝跑的分离胶的中或中下部就停了,marker应该有专门小分子量预染marker,你找试剂公司的人跟他们讲一下你的要求,一般他们会有合适推荐给你的。转膜条件得摸,可以先按照实验室经常用的转膜条件试一下,如果是实验室转膜的目的蛋白分子量比如40kd用2h,你可以用1个小时试一下,转完以后的SDS-PAGE胶可以放到考马斯亮蓝染液染一下,看看小分子量蛋白转的情况,一抗先按照说明书建议的最高浓度做,二抗按照你所在实验
蛋白质印迹(Western blotting)方法原理和优化
或重组的纯化蛋白混合物组成。在凝胶或膜上显示其位置需要染色步骤。预染标准允许在电泳过程中监测蛋白分离,也可以在随后的印迹步骤中指示转移效率。然而,它们比较昂贵且加入染料会影响蛋白迁移率。预染标准在确定分子量时可能 不够精确,并且蛋白质上附加的染料在转移时会影响它们吸附到膜上的能力。 聚丙烯酰胺浓度 凝胶中聚丙烯酰胺浓度可以是均一浓度或是梯度浓度。最常见的聚丙烯酰胺浓度为10%,最适合分离10-150KD范围内的蛋白质。若要分析未知蛋白或许要更宽的分离范围,推荐使用梯度
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