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CCC-HEH-2人胚胎心肌组织来源细胞

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  • ¥800 - 2350
  • DSMZ细胞
  • 美国/德国/日本
  • ACC--1103
  • 2025年07月15日
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    • 详细信息
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    • 保存条件

      -80℃冻存

    • 保质期

      二年

    • 英文名

      CCC-HEH-2

    • 库存

      20

    • 供应商

      上海泽叶生物科技有限公司

    • 规格

      1x10^6 cells

    细胞名称:CCC-HEH-2人胚胎心肌组织来源细胞
    细胞英文(简称):CCC-HEH-2
    细胞来源: ATCC DSMZ JCM ECACC
    代次:P3
    规格:T25
    细胞数:1x10^6 cells
    组织来源:心肌
    细胞形态:贴壁
    细胞活力:95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
    细胞检测:细胞不含有:HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
    培养条件:RPMI-1640 +10% FBS;37℃,5% CO2
    传代方法:建议:1:2-1:3 两天换液一次
    冻存条件:完全培养基50%+40%FBS+10%DMSO
    传代细胞培养操作步骤
    1、 37度水浴加热所有试剂。
    2、 吸取培养培养皿内旧培养液,放置一个干净离心管内。(为稍后终止消化作准备。)
    3、 用PBS清洗培养皿,弃去。
    4、 向瓶内加入消化液(胰蛋白酶液)。以能覆盖培养瓶底为宜。(一般一个大皿1ml)
    5、 2-5分钟后,轻轻震荡培养皿。使CCC-HEH-2人胚胎心肌组织来源细胞从瓶壁脱离形成细胞悬液。显微镜下观察若细胞由贴壁变为悬浮就加入血清(即原培养液)终止消化。
    6、 收集细胞悬液,880转/分、5分钟离心,弃去上清液。
    7、 加培养液至1ml,混匀后取10ul计数细胞。
    8、 根据实验要求取适量细胞留种或接种于新的培养皿或96孔板、24孔板中,再加入相应体积的培养液。(90mm大皿是9ml,中皿好像是4mm,6孔板和小皿是2ml,96孔板是100ul)。
    9、 接种好的培养皿顺时针和逆时针各转三圈,使细胞排列均匀。
    10、 放入暖箱中继续培养。
    细胞计数步骤:
    1、将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板上.
    2、将细胞悬液吸出少许,用台盼兰溶液对被稀释后滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间。(台盼兰用于标记死亡细胞。)
    3、镜下观察,计算计数板八大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算:
    细胞数/ml=8大格细胞总数/ 8×2×10000
    细胞冻存与复苏:
    CCC-HEH-2人胚胎心肌组织来源细胞冻存和复苏的原则:慢冻快融
    当细胞冷到零度以下,可以产生以下变化:细胞器脱水,细胞中可溶性物质浓度升高,并在细胞内形成冰晶。
    如果缓慢冷冻,可使细胞逐步脱水,细胞内不致产生大的冰晶;相反,结晶很大,大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融,目的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重结晶。
     1.冻存细胞
    (1)选对数增生期细胞,在冻存前1d换液。
    (2)按常规方法把培养细胞制备成悬液,计数,使细胞密度达5×106/m1左右密度,离心,去上清。
    (3)加入配制好的冻存液(培养液6.8ml,小牛血清2ml,DMSO 1ml,5.6%NaHCO3 0.1ml),按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞成再悬液。冻存细胞时培养液中加入保护剂10%二甲基亚砜(DMSO) 或甘油,它是一种渗透性保护剂,可迅速透入细胞,提高胞膜对水的通透性,降低冰点,延缓冻结过程,能使细胞内水分在冻结前透出细胞外,在胞外形成冰晶,减少胞内冰晶,从而减少冰晶对细胞的损伤
    (4)分装于无菌冻存管中,每管加1.5m1悬液。
    (5)旋好冻存管并仔细检查,一定要盖紧,作好标记。
    (6)冻存:在特殊的仪器或简易的液氮容器中,按-1℃/min的速度,在30~40 min时间内,下降到液氮表面,再停30 min后,直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度,过快能影响细胞内水分透出,太慢则促进冰晶形成。
    标准程序:
    当温度在-25℃以上时, 1~2℃/min
    当温度达-25℃以下时, 5~10℃/min
    当温度达-100℃时,可迅速放入液氮中
    简易程序:
    将冷冻管(管口要朝上)放入纱布袋内,纱布袋系以线绳,通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口,按每分钟温度下降1~2℃的速度,在40分钟内降至液氮表面,停30分钟后,直接投人液氮中。
      操作时应戴防护眼镜和手套,以免液氮冻伤。
    2. 复苏细胞
    (1)从罐中取出冻存管。
    (2)迅速放入37℃水浴,不时摇动,使其急速融化,30~60s内完成。
    (3)冻存管用70%酒精擦拭消毒后,打开盖子,用吸管将细胞悬液注入离心管中,再滴加10 m1培养液。
    (4)CCC-HEH-2人胚胎心肌组织来源细胞低速离心(880r/min) 5 min,去上清后再用培养液洗一次。
    (5)用培养液适当稀释后,装入培养瓶37℃培养,次日更换一次培养液后,继续培养。以后仍按常规进行培养。
      冻存细胞数量要充分,密度应达到107/m1,在融后稀释20倍后,仍能保持5×105/m1数量。
    ECACC细胞库 88112303 N1E-115 90112715 G-402 94042252 EoL-1 cell 96020925 C32TG (melanoma) 85011428 J774.2
    ECACC细胞库 88113004 ZR-75-30 90112810 HSDM1C1 94042254 B16 melanoma 4A5 96020931 IMR-33 85011429 RAJI
    ECACC细胞库 88113005 A375 90112811 L-2 94042255 JTC-27 96020932 SNU-C2B 85011430 Hep G2
    ECACC细胞库 88113007 ML-1 90112813 Indian Muntjac 94042256 HGC-27 96020937 LBRM TG6 85011432 LTK-
    ECACC细胞库 88120601 XC 90112815 DBS-FCL-2 94042258 H-EMC-SS 5092802 22Rv1 85011433 BHK 21 (clone 13)
    ECACC细胞库 88120801 HL60 Ast.3 90120501 FoLu 94050406 AtT-20/D16v-F2 96020926 3A(tPA-30-1) 85011435 MDCK
    ECACC细胞库 88120802 HL60 Ast.4 90120505 HEPM 94050407 H2.35 5081101 MRC-5 pd25 85011436 BRISTOL 8
    ECACC细胞库 88120803 HL60 M2 90120514 TRA-171 94050408 KB (HeLa derivative) 5072101 MRC-5 pd19 85011437 DAUDI

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