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- DSMZ细胞
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- ACC--1260
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-80℃冻存
- 保质期：
二年
- 英文名：
HPMEC
- 库存：
20
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 规格：
1x10^6 cells
细胞英文(简称）:HPMEC
细胞来源: ATCC DSMZ JCM ECACC
代次:P3
规格:T25
细胞数:1x10^6 cells
组织来源:肺
细胞形态:贴壁
细胞活力:95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
细胞检测:细胞不含有:HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
培养条件:RPMI-1640 +10% FBS；37℃，5% CO2
传代方法建议:1:2-1:3 两天换液一次
冻存条件:完全培养基50%+40%FBS+10%DMSO
传代细胞培养操作步骤
1、 37度水浴加热所有试剂。
2、 吸取培养培养皿内旧培养液，放置一个干净离心管内。（为稍后终止消化作准备。）
3、 用PBS清洗培养皿，弃去。
4、 向瓶内加入消化液（胰蛋白酶液）。以能覆盖培养瓶底为宜。（一般一个大皿1ml）
5、 2-5分钟后，轻轻震荡培养皿。使HPMEC 人肺微血管内皮细胞从瓶壁脱离形成细胞悬液。显微镜下观察若细胞由贴壁变为悬浮就加入血清（即原培养液）终止消化。
6、 收集细胞悬液，880转/分、5分钟离心，弃去上清液。
7、 加培养液至1ml，混匀后取10ul计数细胞。
8、 根据实验要求取适量细胞留种或接种于新的培养皿或96孔板、24孔板中，再加入相应体积的培养液。（90mm大皿是9ml，中皿好像是4mm，6孔板和小皿是2ml，96孔板是100ul）。
9、 接种好的培养皿顺时针和逆时针各转三圈，使细胞排列均匀。
10、 放入暖箱中继续培养。
细胞计数步骤：
1、将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板上.
2、将细胞悬液吸出少许，用台盼兰溶液对被稀释后滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。(台盼兰用于标记死亡细胞。)
3、镜下观察，计算计数板八大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算：
细胞数/ml＝8大格细胞总数/ 8×2×10000
细胞冻存与复苏：
HPMEC 人肺微血管内皮细胞冻存和复苏的原则：慢冻快融
当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。
如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶很大，大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。
1．冻存细胞
（1）选对数增生期细胞，在冻存前1d换液。
（2）按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达5×106／m1左右密度，离心，去上清。
（3）加入配制好的冻存液（培养液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml），按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞成再悬液。冻存细胞时培养液中加入保护剂10％二甲基亚砜(DMSO) 或甘油，它是一种渗透性保护剂，可迅速透入细胞，提高胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤
（4）分装于无菌冻存管中，每管加1.5m1悬液。
（5）旋好冻存管并仔细检查，一定要盖紧，作好标记。
（6）冻存：在特殊的仪器或简易的液氮容器中，按-1℃／min的速度,在30～40 min时间内,下降到液氮表面，再停30 min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。
标准程序：
当温度在-25℃以上时， 1～2℃/min
当温度达-25℃以下时， 5～10℃/min
当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中
简易程序：
将冷冻管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1～2℃的速度，在40分钟内降至液氮表面，停30分钟后，直接投人液氮中。
操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。
2. 复苏细胞
（1）从罐中取出冻存管。
（2）迅速放入37℃水浴，不时摇动，使其急速融化，30～60s内完成。
（3）冻存管用70％酒精擦拭消毒后,打开盖子,用吸管将细胞悬液注入离心管中,再滴加10 m1培养液。
（4）HPMEC 人肺微血管内皮细胞低速离心(880r／min) 5 min，去上清后再用培养液洗一次。
（5）用培养液适当稀释后，装入培养瓶37℃培养，次日更换一次培养液后，继续培养。以后仍按常规进行培养。
冻存细胞数量要充分，密度应达到107／m1，在融后稀释20倍后，仍能保持5×105／m1数量。
| 87032605 | CV-1 | 90021502 | CCF-STTG1 | 93010723 | V79-4 | 96042327 | EMT6/AR1 | 2050101 | MDCK-Protein Free |
| 87042203 | RAB-9 | 90021504 | MCA-RH 7777 | 93011414 | RN 22 | 96042328 | NCI-H69/CPR | 2091238 | HCA-7 Colony 29 |
| 87042204 | G-401 | 90021901 | MOLT-3 | 93011415 | RT4-D6P2T | 96042329 | NCI-H69/LX4 | 2111901 | MOCHA |
| 87042205 | Detroit 562 | 90022302 | SK-N-MC | 93012901 | NBT-II | 96042330 | NCI-H69VCR/R | 3061601 | NS0-Serum-Free |
| 87042206 | 6-23 (clone 6) | 90030801 | SV-T2 | 93020513 | A.704 | 96042331 | NCI-H69/LX10 | 3071601 | Rolf B1.T |
| 87042207 | HEL 299 | 90030802 | M-MSV-BALB/3T3 | 93021013 | HeLa | 96042332 | NCI-H69/LX20 | 3092501 | Sp2/0-Ag14-TurboDoma |
| 87050701 | ARL-6 | 90030804 | IgH-2 | 93022307 | TF1 | 96042333 | MOR/CPR | 3092502 | P3X63Ag8.653-TurboDoma |
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文献和实验实验材料： 1. 手术切除的正常肺组织 2. 胰蛋白酶/EDTA液：0.05%胰蛋白酶，0.5mmol/L EDTA 3. 6孔培养板：用多聚赖氨酸包被 4. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS（pH=7.4），添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素和200000U/L庆大霉素，pH7.4 5. 手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪，眼科镊 6. 离心管（15ml、50ml） 实验方法： 1. 将肺组织至于无菌的培养皿中用含双抗的1×PBS
thx221 有没有哪位大侠做内皮细胞方面的信号转导的？？？帮忙给提供几个通路做参考！或者给我点相关的最新研究文献！我实在是找不到这方面的最新研究进展，大家帮个忙吧！先谢谢了！！！ 编年张 加此QQ492207858 chuckdouble thx221 wrote: 有没有哪位大侠做内皮细胞方面的信号转导的？？？帮忙给提供几个通路做参考！或者给我点相关
hbsyliuyang rt 请不吝赐教 感谢！ david_xmu 没什么太大的区别，另外内皮细胞在不同的培养基中培养可能会有形态上的区别 hbsyliuyang 谢谢这位达人！ 拜 本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴 师兄微信号：shixiongcoming
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