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- DSMZ细胞
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- ACC--1286
- 2025年07月11日
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- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-80℃冻存
- 保质期：
二年
- 英文名：
HVSMC
- 库存：
20
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 规格：
1x10^6 cells
细胞英文(简称）:HVSMC
细胞来源: ATCC DSMZ JCM ECACC
代次:P3
规格:T25
细胞数:1x10^6 cells
组织来源:血管平滑肌
细胞形态:贴壁
细胞活力:95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
细胞检测:细胞不含有:HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
培养条件:RPMI-1640 +10% FBS；37℃，5% CO2
传代方法建议:1:2-1:3 两天换液一次
冻存条件:完全培养基50%+40%FBS+10%DMSO
传代细胞培养操作步骤
1、 37度水浴加热所有试剂。
2、 吸取培养培养皿内旧培养液，放置一个干净离心管内。（为稍后终止消化作准备。）
3、 用PBS清洗培养皿，弃去。
4、 向瓶内加入消化液（胰蛋白酶液）。以能覆盖培养瓶底为宜。（一般一个大皿1ml）
5、 2-5分钟后，轻轻震荡培养皿。使HVSMC人血管平滑肌细胞从瓶壁脱离形成细胞悬液。显微镜下观察若细胞由贴壁变为悬浮就加入血清（即原培养液）终止消化。
6、 收集细胞悬液，880转/分、5分钟离心，弃去上清液。
7、 加培养液至1ml，混匀后取10ul计数细胞。
8、 根据实验要求取适量细胞留种或接种于新的培养皿或96孔板、24孔板中，再加入相应体积的培养液。（90mm大皿是9ml，中皿好像是4mm，6孔板和小皿是2ml，96孔板是100ul）。
9、 接种好的培养皿顺时针和逆时针各转三圈，使细胞排列均匀。
10、 放入暖箱中继续培养。
细胞计数步骤：
1、将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板上.
2、将细胞悬液吸出少许，用台盼兰溶液对被稀释后滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。(台盼兰用于标记死亡细胞。)
3、镜下观察，计算计数板八大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算：
细胞数/ml＝8大格细胞总数/ 8×2×10000
细胞冻存与复苏：
HVSMC人血管平滑肌细胞冻存和复苏的原则：慢冻快融
当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。
如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶很大，大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。
1．冻存细胞
（1）选对数增生期细胞，在冻存前1d换液。
（2）按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达5×106／m1左右密度，离心，去上清。
（3）加入配制好的冻存液（培养液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml），按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞成再悬液。冻存细胞时培养液中加入保护剂10％二甲基亚砜(DMSO) 或甘油，它是一种渗透性保护剂，可迅速透入细胞，提高胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤
（4）分装于无菌冻存管中，每管加1.5m1悬液。
（5）旋好冻存管并仔细检查，一定要盖紧，作好标记。
（6）冻存：在特殊的仪器或简易的液氮容器中，按-1℃／min的速度,在30～40 min时间内,下降到液氮表面，再停30 min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。
标准程序：
当温度在-25℃以上时， 1～2℃/min
当温度达-25℃以下时， 5～10℃/min
当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中
简易程序：
将冷冻管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1～2℃的速度，在40分钟内降至液氮表面，停30分钟后，直接投人液氮中。
操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。
2. 复苏细胞
（1）从罐中取出冻存管。
（2）迅速放入37℃水浴，不时摇动，使其急速融化，30～60s内完成。
（3）冻存管用70％酒精擦拭消毒后,打开盖子,用吸管将细胞悬液注入离心管中,再滴加10 m1培养液。
（4）HVSMC人血管平滑肌细胞低速离心(880r／min) 5 min，去上清后再用培养液洗一次。
（5）用培养液适当稀释后，装入培养瓶37℃培养，次日更换一次培养液后，继续培养。以后仍按常规进行培养。
冻存细胞数量要充分，密度应达到107／m1，在融后稀释20倍后，仍能保持5×105／m1数量。
| ECACC细胞库 | 86060301 | SC-1 | 90040512 | LA-4 | 8011101 | Vero (AC-free) | 94122105 | SVCT | 6120601 | KARPAS 231 |
| ECACC细胞库 | 86060302 | LBRM-33-1A5 | 90050801 | MDBK | 91091914 | RT4 | 95010509 | CA46 | 7030901 | H157 |
| ECACC细胞库 | 86061001 | RBL-1 | 90050803 | NCTC 2071 | 91092002 | 70Z/3 | 7032901 | CGR8 | 96020948 | ChaGo-K-1 |
| ECACC细胞库 | 86061902 | AC2 | 90060504 | C127I | 91100402 | A2058 | 95011815 | SK-N-BE(2) | 6031001 | BICR 16 |
| ECACC细胞库 | 86062401 | BL-3 | 90061904 | BCL1 Clone CW13.20-3B3 | 91110711 | M1 | 95011816 | BE(2)-M17 | 5092806 | VP303 |
| ECACC细胞库 | 86062703 | Hep 3B | 89071903 | AK-D | 94072023 | KYSE-410 | 95011817 | BE(2)-C | 90062802 | L5178Y-R |
| ECACC细胞库 | 86070201 | JH4 clone 1 | 89072101 | 26 CB1 | 91112122 | Subclone 707 BUF | 95012613 | PNT2 | 93050408 | L5178Y-S |
| ECACC细胞库 | 86072501 | RFL-6 | 89072610 | GH1 | 91112124 | RAJI TK+ | 95012614 | PNT1A | 6032203 | BICR 3 |
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文献和实验最近第一次养细胞就养成功了,非常高兴,发上来跟大家分享 养细胞主要是 无菌 ,我用得是组织块消化法,首先要把培养用的DMEM和PBS 用过滤法抽吸式过滤一下,取材时注意无菌,150克的大鼠用7毫升的1%戊巴比妥消毒,用DMEM反复清洗,用眼科剪刮去外膜,剪开血管,用棉签刮去内膜的脂滴,再用眼科剪剪成碎块,铺到培养瓶里,均匀铺开,滴少许含20%FCS的DMEM湿润一下,然后再加3---5毫升的DMEM(含20%FCS)到培养瓶内,使铺组织块的一面向上,放到孵育箱里,约5个小时
Isolation of renal vascular trees and culture of the vascular smooth muscle cell 1. Male Wistar rats of about 250 g body wt were anesthetized with ether and were decapitated. 2. Kidneys and thoracic aorta were removed, rinsed
培养了快一个月的细胞了，今天终于鉴定出是我想要的血管平滑肌细胞。我养的是大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,采用的是组织贴块法培养。10天后传第一代（图1），16天后第二代（图2），22天后第三代（图3），并做a－actin免疫细胞化学鉴定（图4）。 图1图2图3 图4典型的血管平滑肌细胞生长"hill and valley"现象。
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