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-20℃
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3个月
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Wuhan Miaoling Bioscience & Technology Co.,Ltd
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1000
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武汉淼灵生物科技有限公司
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20μl
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文献和实验手把手教你利用 CRISPR-Cas9 系统精准敲除靶标基因
puromycin 抗性筛选标记。图 3 PX458M 图谱图 4 PX459M 图谱图 5 EZ-GuideXH 图谱PX458M 和 PX459M 载体是从张峰实验室 PX458 and PX459 载体改造过来的。主要是引入了第二个向导性 RNA 插入的多克隆位点。EZ-GuideXH 来源于 EZ-T 克隆载体。四、Guide RNA 的插入根据张峰实验的实验操作方法, guide RNA 插入方法很简单。如图 6 所示,可以用 BbsI 消化 PX458 载体, Guide RNA 是通过引物退火方法
重组插入目的片段,启动子,终止子等是构建完整表达框时所需要的元件,标签序列等可以用于表达鉴定等实验。在质粒载体设计及构建工作中,根据实验的需求情况可以增减质粒载体上的具体元件,以及插入实验需要的相关基因。 2、质粒载体构建的常规流程 通常质粒载体构建的操作需要经过下图所示流程。其中目标序列确定需要根据实验需求以及查阅生物信息数据库的相关序列来确定。目标序列 PCR 扩增则根据实验需求以基因组 DNA 或者反转录得到的 cDNA 为模板,经过高保真 PCR 实验扩增得到相关目的片段。质粒载体确定由实验
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