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- DSMZ细胞
- 美国/德国/日本
- ACC--1355
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-80℃冻存
- 保质期：
二年
- 英文名：
MHCC97H
- 库存：
20
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 规格：
1x10^6 cells
细胞英文(简称）:MHCC97H
细胞来源: ATCC DSMZ JCM ECACC
代次:P3
规格:T25
细胞数:1x10^6 cells
组织来源:肝癌
细胞形态:贴壁
细胞活力:95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
细胞检测:细胞不含有:HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
培养条件:DMEM(高糖) +10% FBS；37℃，5% CO2
传代方法建议:1:2-1:3 两天换液一次
冻存条件:90%FBS+10%DMSO
传代细胞培养操作步骤
1、 37度水浴加热所有试剂。
2、 吸取培养培养皿内旧培养液，放置一个干净离心管内。（为稍后终止消化作准备。）
3、 用PBS清洗培养皿，弃去。
4、 向瓶内加入消化液（胰蛋白酶液）。以能覆盖培养瓶底为宜。（一般一个大皿1ml）
5、 2-5分钟后，轻轻震荡培养皿。使MHCC97H人高转移性肝癌细胞从瓶壁脱离形成细胞悬液。显微镜下观察若细胞由贴壁变为悬浮就加入血清（即原培养液）终止消化。
6、 收集细胞悬液，880转/分、5分钟离心，弃去上清液。
7、 加培养液至1ml，混匀后取10ul计数细胞。
8、 根据实验要求取适量细胞留种或接种于新的培养皿或96孔板、24孔板中，再加入相应体积的培养液。（90mm大皿是9ml，中皿好像是4mm，6孔板和小皿是2ml，96孔板是100ul）。
9、 接种好的培养皿顺时针和逆时针各转三圈，使细胞排列均匀。
10、 放入暖箱中继续培养。
细胞计数步骤：
1、将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板上.
2、将细胞悬液吸出少许，用台盼兰溶液对被稀释后滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。(台盼兰用于标记死亡细胞。)
3、镜下观察，计算计数板八大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算：
细胞数/ml＝8大格细胞总数/ 8×2×10000
细胞冻存与复苏：
MHCC97H人高转移性肝癌细胞冻存和复苏的原则：慢冻快融
当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。
如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶很大，大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。
1．冻存细胞
（1）选对数增生期细胞，在冻存前1d换液。
（2）按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达5×106／m1左右密度，离心，去上清。
（3）加入配制好的冻存液（培养液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml），按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞成再悬液。冻存细胞时培养液中加入保护剂10％二甲基亚砜(DMSO) 或甘油，它是一种渗透性保护剂，可迅速透入细胞，提高胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤
（4）分装于无菌冻存管中，每管加1.5m1悬液。
（5）旋好冻存管并仔细检查，一定要盖紧，作好标记。
（6）冻存：在特殊的仪器或简易的液氮容器中，按-1℃／min的速度,在30～40 min时间内,下降到液氮表面，再停30 min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。
标准程序：
当温度在-25℃以上时， 1～2℃/min
当温度达-25℃以下时， 5～10℃/min
当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中
简易程序：
将冷冻管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1～2℃的速度，在40分钟内降至液氮表面，停30分钟后，直接投人液氮中。
操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。
2. 复苏细胞
（1）从罐中取出冻存管。
（2）迅速放入37℃水浴，不时摇动，使其急速融化，30～60s内完成。
（3）冻存管用70％酒精擦拭消毒后,打开盖子,用吸管将细胞悬液注入离心管中,再滴加10 m1培养液。
（4）MHCC97H人高转移性肝癌细胞低速离心(880r／min) 5 min，去上清后再用培养液洗一次。
（5）用培养液适当稀释后，装入培养瓶37℃培养，次日更换一次培养液后，继续培养。以后仍按常规进行培养。
冻存细胞数量要充分，密度应达到107／m1，在融后稀释20倍后，仍能保持5×105／m1数量。
| ECACC细胞库 | 88042802 | PUTKO | 90110508 | 3A sub E | 93120836 | DK | 98110201 | SHP-77 | 84121901 | HeLa Ohio |
| ECACC细胞库 | 88042803 | Jurkat E6.1 | 90110510 | OMK (637-69) | 93120837 | SK MES 1 | 98120701 | GM1899A | 84121902 | C16 (HeLa derivative) |
| ECACC细胞库 | 88042804 | A9HT | 90110512 | CCD-39Lu | 93120838 | TK-TS 13 | 99011801 | MDST8 | 84121903 | MDCK |
| ECACC细胞库 | 88050503 | Mv.1.Lu | 90110513 | CCD-37Lu | 93120839 | WKD (HeLa derivative) | 99040201 | Ishikawa | 85011401 | P3X63Ag8 |
| ECACC细胞库 | 88051601 | C8166 | 90110514 | CCD-34Lu | 93120840 | BHK 21 STRAIN 31 | 99072801 | 10T½ | 85011402 | S1814.PB5 |
| ECACC细胞库 | 88062428 | A 172 | 90110515 | CCD-33Lu | 93120841 | BHK 21 STRAIN 35 | 99072802 | NB69 | 85011403 | PSA1 |
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文献和实验学问题。 案例一：多组学分析揭示肝癌起始细胞免疫逃逸机制和精准治疗策略 发表期刊：Cancer Cell 影响因子：44.5 发表时间：2024 年 12 月 研究疾病：肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma,HCC） 样本类型：患者来源的肝癌类器官（HCC organoids），肝癌细胞系（Hep3B,Huh7,PLC/PRF/5, MHCC97 H,Hep53.4）和小鼠模型（包括自发性肝癌模型和异种移植模型） 样本数量：11 个 HCC 类器官样本，4 个肝癌细胞系样本
脱氢酶，由于肝细胞受损害（变性、坏死、细胞膜通透性升高）而释放入血，使这些酶在血清中升高。在肝细胞中谷―丙转氨酶活力比较高，因此当肝细胞损害时，血清谷―丙轻氨酶升高比较明显。正常值；金氏单位＜100，穆氏单位＜40。测定血清谷―丙转氨酶有助于判断病情的变化。 2．从胆道排出的酶，因排泄障碍或生成增多，而在血清内增多。例如碱性磷酸酶、γ谷氨酰转肽酶。 碱性磷酸酶（AKP）的作用是在碱性环境中水解有机磷酸脂类化合物，并促进磷酸钙在骨骼中沉积。正常人血清AKP主要来自肝脏，正常
内自身的酶降解。其中抗体类蛋白最为稳定，IgG甚至能在血清中4℃稳定保存23天，而酶类在血清中4℃放置8 h即会造成活性下降，血清蛋白则能在24 h内保持稳定。 多肽类： 根据分子量大小，较长的肽键稳定性能与蛋白相当，分子量越小稳定性越差，血清样本建议24 h内检测处理，-80℃冻存时应避免反复冻融。 氨基酸： 在中性条件下可在-80℃~ -20℃冻存数月，但4℃以上开始，血清样本中氨基酸会缓慢被酶代谢，在酶类丰富的组织液和细胞裂解液中更容易代谢。建议加快冻融复温后的检测进程。
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