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- DSMZ细胞
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- 2026年10月14日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-80℃冻存
- 保质期：
二年
- 英文名：
NCI-H205
- 库存：
20
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 规格：
1x10^6 cells
细胞英文(简称）:NCI-H205
细胞来源: ATCC DSMZ JCM ECACC
代次:P3
规格:T25
细胞数:1x10^6 cells
组织来源:肾
细胞形态:贴壁
细胞活力:95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
细胞检测:细胞不含有:HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
培养条件:RPMI-1640 +10% FBS；37℃，5% CO2
传代方法建议:1:2-1:3 两天换液一次
冻存条件:完全培养基50%+40%FBS+10%DMSO
传代细胞培养操作步骤
1、 37度水浴加热所有试剂。
2、 吸取培养培养皿内旧培养液，放置一个干净离心管内。（为稍后终止消化作准备。）
3、 用PBS清洗培养皿，弃去。
4、 向瓶内加入消化液（胰蛋白酶液）。以能覆盖培养瓶底为宜。（一般一个大皿1ml）
5、 2-5分钟后，轻轻震荡培养皿。使NCI-H205人肾上腺腺瘤细胞从瓶壁脱离形成细胞悬液。显微镜下观察若细胞由贴壁变为悬浮就加入血清（即原培养液）终止消化。
6、 收集细胞悬液，880转/分、5分钟离心，弃去上清液。
7、 加培养液至1ml，混匀后取10ul计数细胞。
8、 根据实验要求取适量细胞留种或接种于新的培养皿或96孔板、24孔板中，再加入相应体积的培养液。（90mm大皿是9ml，中皿好像是4mm，6孔板和小皿是2ml，96孔板是100ul）。
9、 接种好的培养皿顺时针和逆时针各转三圈，使细胞排列均匀。
10、 放入暖箱中继续培养。
细胞计数步骤：
1、将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板上.
2、将细胞悬液吸出少许，用台盼兰溶液对被稀释后滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。(台盼兰用于标记死亡细胞。)
3、镜下观察，计算计数板八大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算：
细胞数/ml＝8大格细胞总数/ 8×2×10000
细胞冻存与复苏：
NCI-H205人肾上腺腺瘤细胞冻存和复苏的原则：慢冻快融
当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。
如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶很大，大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。
1．冻存细胞
（1）选对数增生期细胞，在冻存前1d换液。
（2）按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达5×106／m1左右密度，离心，去上清。
（3）加入配制好的冻存液（培养液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml），按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞成再悬液。冻存细胞时培养液中加入保护剂10％二甲基亚砜(DMSO) 或甘油，它是一种渗透性保护剂，可迅速透入细胞，提高胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤
（4）分装于无菌冻存管中，每管加1.5m1悬液。
（5）旋好冻存管并仔细检查，一定要盖紧，作好标记。
（6）冻存：在特殊的仪器或简易的液氮容器中，按-1℃／min的速度,在30～40 min时间内,下降到液氮表面，再停30 min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。
标准程序：
当温度在-25℃以上时， 1～2℃/min
当温度达-25℃以下时， 5～10℃/min
当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中
简易程序：
将冷冻管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1～2℃的速度，在40分钟内降至液氮表面，停30分钟后，直接投人液氮中。
操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。
2. 复苏细胞
（1）从罐中取出冻存管。
（2）迅速放入37℃水浴，不时摇动，使其急速融化，30～60s内完成。
（3）冻存管用70％酒精擦拭消毒后,打开盖子,用吸管将细胞悬液注入离心管中,再滴加10 m1培养液。
（4）NCI-H205人肾上腺腺瘤细胞低速离心(880r／min) 5 min，去上清后再用培养液洗一次。
（5）用培养液适当稀释后，装入培养瓶37℃培养，次日更换一次培养液后，继续培养。以后仍按常规进行培养。
冻存细胞数量要充分，密度应达到107／m1，在融后稀释20倍后，仍能保持5×105／m1数量。
| ECACC细胞库 | 89050908 | A-72 | 91031101 | C2C12 | 94090901 | Psi-CRIP | 6061901 | HCA-2 | 85030804 | RAMOS-EHRB |
| ECACC细胞库 | 89051503 | Duck Embryo | 91031102 | Detroit 539 | 94090902 | Psi-CRE | 4072112 | BICR 82 | 85040102 | TR33B |
| ECACC细胞库 | 89051701 | Hs 68 | 91031103 | MPC-11 | 94092301 | SK-PN-DW | 6072602 | KARPAS 45 | 85040103 | BHK/AC9 |
| ECACC细胞库 | 89051702 | C-4I | 91031104 | SW 837 | 94092302 | SK-N-AS | 6072604 | KARPAS 299 | 85042301 | TR6Bc1 |
| ECACC细胞库 | 89051703 | DDT1-MF2 | 91041114 | CHSE-214 | 94092303 | VA-ES-BJ | 6041202 | LA-N-2 | 85042302 | B50 |
| ECACC细胞库 | 89051704 | Bu (IMR-31) | 91051511 | J774A.1 | 94101451 | AT-3.1 | 6061902 | HCA-7 | 85042303 | B12 |
| ECACC细胞库 | 89051705 | Clone C6/36 | 91060526 | TM3 | 94101452 | AT6.1 | 6072607 | KARPAS 1106P | 85042304 | B92 |
| ECACC细胞库 | 89070101 | Sf9 | 91060527 | UMR-108 | 94101453 | G | 6070601 | RB247C | 85042305 | B65 |
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文献和实验NCI-H526来源于一名55岁白人男性小细胞肺癌（Stage E）患者的骨转移灶，从肺部分离获得。该细胞高表达两个小细胞肺癌生化标志物——神经元特异性烯醇化酶和脑肌酸激酶同工酶，是肺癌研究中常用的体外模型之一。 形态特征与生长方式 悬浮生长，细胞以大量聚团形式存在。刚复苏时细胞是分散的，24-48小时后状态逐渐恢复，开始聚团生长。传代时不需要完全吹散成单细胞，把大团吹成小团即可，避免团块中间的细胞缺乏营养。 培养要点与注意事项 培养基选用1640添加10%胎牛血清及1%双抗
都是贴壁细胞，在消化传代过程中，步骤如下：倒尽旧的培养液－＞用无血清的培养基清洗一两次－＞加入一定量的胰酶，置于37度培养箱中5--10分钟，使细胞悬浮－＞显微镜下观察，待细胞大部分变圆时，回到超静台－＞加入一定量的含血清的新培养液，以终止胰酶作用－＞反复吹打细胞－＞再置显微镜下观察，直到细胞全部悬浮起来－＞吸出一部分加入新的培养瓶中－＞最后再补充加入一定量新的培养液。注意： 1、吹细胞时尽量多吹边角儿，此处细胞生长的多。2、吸出细胞前要混匀，可以剧烈震荡培养瓶。3、我们用的是DMEM
NCI-H446人小细胞肺癌细胞培养全攻略：从基本信息到实操要点
做小细胞肺癌研究的朋友，对NCI-H446这个细胞系一定不陌生。这篇文章把它的来源、特性、培养要点都梳理了一遍，新手也能快速上手。 细胞系名称与来源 细胞名称：NCI-H446（人小细胞肺癌细胞），也常简称H446。 别称：H-446、NCI-446、NCIH446。 来源：1982年由Carney和Gazdar等人从一位61岁白人男性小细胞肺癌患者的胸腔积液中分离建系。值得一提的是，原始肿瘤的形态并不符合典型小细胞肺癌的特征。 细胞特性与应用场景 NCI-H446属于
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