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- DSMZ细胞
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- ACC--1410
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-80℃冻存
- 保质期：
二年
- 英文名：
PANC-1
- 库存：
20
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 规格：
1x10^6 cells
细胞英文(简称）:PANC-1
细胞来源: ATCC DSMZ JCM ECACC
代次:P3
规格:T25
细胞数:1x10^6 cells
组织来源:胰腺癌
细胞形态:贴壁
细胞活力:95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
细胞检测:细胞不含有:HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
培养条件:RPMI-1640 +10% FBS；37℃，5% CO2
传代方法建议:1:2-1:3 两天换液一次
冻存条件:90%FBS+10%DMSO
传代细胞培养操作步骤
1、 37度水浴加热所有试剂。
2、 吸取培养培养皿内旧培养液，放置一个干净离心管内。（为稍后终止消化作准备。）
3、 用PBS清洗培养皿，弃去。
4、 向瓶内加入消化液（胰蛋白酶液）。以能覆盖培养瓶底为宜。（一般一个大皿1ml）
5、 2-5分钟后，轻轻震荡培养皿。使PANC-1人胰腺癌细胞从瓶壁脱离形成细胞悬液。显微镜下观察若细胞由贴壁变为悬浮就加入血清（即原培养液）终止消化。
6、 收集细胞悬液，880转/分、5分钟离心，弃去上清液。
7、 加培养液至1ml，混匀后取10ul计数细胞。
8、 根据实验要求取适量细胞留种或接种于新的培养皿或96孔板、24孔板中，再加入相应体积的培养液。（90mm大皿是9ml，中皿好像是4mm，6孔板和小皿是2ml，96孔板是100ul）。
9、 接种好的培养皿顺时针和逆时针各转三圈，使细胞排列均匀。
10、 放入暖箱中继续培养。
细胞计数步骤：
1、将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板上.
2、将细胞悬液吸出少许，用台盼兰溶液对被稀释后滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。(台盼兰用于标记死亡细胞。)
3、镜下观察，计算计数板八大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算：
细胞数/ml＝8大格细胞总数/ 8×2×10000
细胞冻存与复苏：
PANC-1人胰腺癌细胞冻存和复苏的原则：慢冻快融
当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。
如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶很大，大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。
1．冻存细胞
（1）选对数增生期细胞，在冻存前1d换液。
（2）按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达5×106／m1左右密度，离心，去上清。
（3）加入配制好的冻存液（培养液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml），按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞成再悬液。冻存细胞时培养液中加入保护剂10％二甲基亚砜(DMSO) 或甘油，它是一种渗透性保护剂，可迅速透入细胞，提高胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤
（4）分装于无菌冻存管中，每管加1.5m1悬液。
（5）旋好冻存管并仔细检查，一定要盖紧，作好标记。
（6）冻存：在特殊的仪器或简易的液氮容器中，按-1℃／min的速度,在30～40 min时间内,下降到液氮表面，再停30 min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。
标准程序：
当温度在-25℃以上时， 1～2℃/min
当温度达-25℃以下时， 5～10℃/min
当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中
简易程序：
将冷冻管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1～2℃的速度，在40分钟内降至液氮表面，停30分钟后，直接投人液氮中。
操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。
2. 复苏细胞
（1）从罐中取出冻存管。
（2）迅速放入37℃水浴，不时摇动，使其急速融化，30～60s内完成。
（3）冻存管用70％酒精擦拭消毒后,打开盖子,用吸管将细胞悬液注入离心管中,再滴加10 m1培养液。
（4）PANC-1人胰腺癌细胞低速离心(880r／min) 5 min，去上清后再用培养液洗一次。
（5）用培养液适当稀释后，装入培养瓶37℃培养，次日更换一次培养液后，继续培养。以后仍按常规进行培养。
冻存细胞数量要充分，密度应达到107／m1，在融后稀释20倍后，仍能保持5×105／m1数量。
| ECACC细胞库 | 87101501 | COLO 320HSR | 90073001 | LL24 | 93052620 | COLO 206F | 98050130 | MFM-223 | 91112502 | 143B |
| ECACC细胞库 | 87110901 | HeLa S3 | 90073002 | Fc3Tg | 93052621 | COLO 741 | 98050131 | MFE-280 | 92012401 | HT29 gluc C1 |
| ECACC细胞库 | 87111902 | JTC-19 | 90083001 | L-M (TK-) | 93052623 | COLO 720 L | 98052918 | Clone 15 HL-60 | 92012463 | LUDLU-1 |
| ECACC细胞库 | 87111904 | FM3Ats C1.T85 | 90091902 | 4647 | 93061119 | DBTRG.05MG | 98061003 | HKT-1097 | 93031204 | SCL 4.1/F7 |
| ECACC细胞库 | 87111906 | CHL | 90092601 | BGM | 93061524 | NIH 3T3 | 98061101 | MEF-1 | 93120818 | CALU 1 |
| ECACC细胞库 | 87111908 | L5178Y | 90092701 | 3T3-MSV | 93061607 | CHO-K1/SF | 98062312 | LB7 | 93120819 | CAKI 2 |
| ECACC细胞库 | 87112508 | LL29 (AnHa) | 90092702 | Sf 1Ep | 93070901 | CC-1 | 98062313 | LB42 | 93120820 | EPC |
| ECACC细胞库 | 87120401 | 707B1011C3 | 90100401 | Aedes albopictus | 93072109 | COLO 677 | 98062316 | LB173 | 93120821 | ESK-4 |
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文献和实验目的 建立荷人胰腺癌裸小鼠模型,研究其生物学特性,观察8988 胰腺癌细胞株在移植前后的形态学变化。方法 将人胰腺癌细胞株8988 接种于裸鼠腋窝处皮下,每周测量肿瘤大小,第42d 处死小鼠。肿瘤组织及相关脏器送病理及电镜检查,放射免疫法检测相关抗原。皮下肿瘤组织细胞及细胞株培养,HE 染色。结果 肿瘤生长较快,成功率高,病理及电镜检查符合人胰腺癌细胞特征。肿瘤组织细胞及培养细胞形态学未见显著差异。结论 荷人胰腺癌细胞株8988 裸小鼠模型建立方法较简便,细胞形态无明显差异,且保持了人胰腺癌
、人胰腺癌裸鼠原位移植模型 与肝癌原位移植方法类似，但由于胰腺质地软且不成形，原位移植手术难度较大些。 四、骨肿瘤、骨转移小鼠模型 动物麻醉后呈仰卧位，固定前肢及左后肢，使右后肢弯曲，用1ml注射器刺入胫股骨关节间隙，从胫骨头关节窝凹点处进针, 顺着胫骨骨干长轴方向缓慢钻透胫骨头松质骨部分进入骨髓腔，缓缓注入细胞悬液。 关于实验动物，肿瘤模型构建最常用的实验动物为裸小鼠，其先天性胸腺发育异常, 几乎没有免疫排斥反应, 可以进行异种动物组织移植，肿瘤
、靶细胞分别收集1×106 Panc1以及从6例肿瘤组织中分离获得的胰腺癌细胞(编号S1-S6), 重悬于0.5mL不含碳酸氢钠的完全培养液. 加入3.7 MBq 51Cr铬酸钠, 37℃水浴中标记1 h, 洗涤细胞三次, 调整细胞浓度为5×104/mL.3、细胞毒效应向96孔板加入靶细胞, 每孔100 μL. 按效应细胞:靶细胞= 50:1的比例向各孔加入100 μL不同效应细胞. 每组均设3个复孔, 阴性对照孔(自发释放)只加100 μL完全培养液, 阳性对照孔(最大释放)加100 μL 1
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