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上海研谨生物科技有限公司
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文献和实验Western blot中硝酸纤维膜和PVDF膜的选择及其特点
使用。 PVDF转移膜:PVDF是一种高强度、耐腐蚀的物质,通常是用来制造水管的。 PVDF膜可以结合蛋白质,而且可以分离小片段的蛋白质,最初是将它用于蛋白质的序列测定,因为硝酸纤维素膜在Edman试剂中会降解,所以就寻找了 PDVF作为替代品,虽然PDVF膜结合蛋白的效率没有硝酸纤维素膜高,但由于它的稳定、耐腐蚀使它成为蛋白测序理想的用品,一直沿用至今。PVDF膜与 硝酸纤维素膜一样,可以进行各种染色和化学发光检测,也有很广的适用范围。这种PVDF膜,灵敏度、分辨率和蛋白亲和力在精细工艺下比常规
也是需要考虑的因素。常规的硝酸纤维素膜比较脆,漂洗一两次就会破损,不能反复使用。 PVDF转移膜:PVDF是一种高强度、耐腐蚀的物质,通常是用来制造水管的。 PVDF膜可以结合蛋白质,而且可以分离小片段的蛋白质,最初是将它用于蛋白质的序列测定,因为硝酸纤维素膜在Edman试剂中会降解,所以就寻找了 PDVF作为替代品,虽然PDVF膜结合蛋白的效率没有硝酸纤维素膜高,但由于它的稳定、耐腐蚀使它成为蛋白测序理想的用品,一直沿用至今。PVDF膜与 硝酸纤维素膜一样,可以进行各种染色和化学
,500- 1000μl/瓶) ,刮落细胞,转移到Ep管。注意:冰上操作。 4.超声 10~15秒剪切DNA以减低样品粘性。 5.煮沸样品5 minutes。 6.离心12000g,5 min,取上清。 7.电泳分离:上样15μl~20μl 至 SDS-PAGE 胶 (10 cm x 10 cm)电泳。 如要定量检测某蛋白的表达水平, 应用RIPA裂解液(1 ml per 107 cells/100 mm dish/150cm2 flask)裂解
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