转移膜，3 m （卷） 0.45 µm ，Biodyne P

膜在分子诊断学中的应用

的选择。然而，并非所有的尼龙膜都相同。尼龙配方和生产过程不同，导致膜在同一检测条件下的表现不同。例如，尽管Biodyne B膜和Biodyne Plus膜都带正电，但由于生产方法不同，一个显示极好的敏感性和低自然干扰性，而另一个无此特性而不值得利用（见图5）。其他尼龙6，6膜因有不同的表面化学组成而使信噪比不同。这些不同使人们很难从一种尼龙膜推断另一种的数据及协议。 产品设计者将膜的选择和DNA检测草案完善后，可以获得更好性能的产品。 下面是在选择分子应用膜时开发者应考虑的几个方面。 表 II. 分子诊断学中

Western blot中硝酸纤维膜和PVDF膜的选择及其特点

亲和力的结合在一起，虽然这其中的机制还不是十分清楚，但由于硝酸纤维素膜(NC膜)的这个特性，而且易于封闭非特异性结合，从而得到了广泛的应用。在非离子型的去污剂作用下，结合的蛋白还可以被洗脱下来。根据被转移的蛋白分子量大小，要选择不同 孔径的硝酸纤维素膜(NC膜)。因为随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量蛋白的结合就越牢固。但是膜孔径如果小于0.1mm，蛋白的转移就很难进行了。因此，我们通 常用0.45μm和0.2μm两种规格的硝酸纤维素膜。大于20kD的蛋白就可以用0.45μm的膜

Western Blot详解(原理、试剂、步骤及问题解答)

固；PVDF膜结合牢固，耐高温，特别适合于蛋白印迹。就韧性而言：尼龙膜较强；硝酸纤维素膜较脆，易破碎；PVDF膜较强。就重复性而言：尼龙膜可反复用于分子杂交，杂交后，探针分子可经碱变性被洗脱下来；硝酸纤维素膜不能重复使用；PVDF膜可以重复使用。Y. 在做Western Blot时，PBDF膜用甲醇浸泡的目的？解答：PVDF膜用甲醇泡的目的是为了活化PVDF膜上面的正电基团，使它更容易跟带负电的蛋白质结合，做小分子的蛋白转移时多加甲醇也是这个目的。Z. 检测磷酸化的JNK 和非磷酸化的JNK可以在同一