北京耐热逆转录酶II厂家价格

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名称：北京耐热逆转录酶II厂家价格
产地：国产|进口
规格：2000U
英文名：Reverse Transcriptase II
品牌：百奥莱博
Reverse Transcriptase（第二代耐热逆转录酶）是Reverse Transcriptase（第一代耐热逆转录）的升级产品，是在M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase基础上通过体外分子进化技术获得的全新耐热逆转录酶。与上一代相比，进一步大幅提高了热稳定性，50℃下半衰期超过240min，并长时间耐受55℃高温且保持稳定，非常适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。此外，增加了多个突变位点，进一步增强了模板亲和力和行进性，大幅提升全长cDNA的合成能力，可获得长达20 kb的cDNA。另外，对于常见的逆转录抑制物具有更高的耐受度，非常适合于植物组织RNA的逆转录反应。

活性定义：以Poly(rA) Oligo(dT)为模板/引物，在37℃，10min内，掺入1 nmol的dTTP为酸不性溶物质所需要酶量定义为1个活性单位（U）。

质量控制
核酸外切酶残留检测：200 U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在37 ºC下孵育1h，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：200 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在37 ºC下孵育1h，DNA的电泳谱带不发生变化。
RNase残留检测：200 U本品和1 μg小鼠肝脏总RNA在37 ºC下孵育1h，RNA电泳谱带不发生变化。
功能检测1：逆转录体系中加入200 U本品，以100 pg Hela cell total RNA为模板，Oligo(dT)23为引物，50 ºC反应30min。取10% cDNA产物进行PCR扩增β-actin基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的550 bp条带。
功能检测2：逆转录体系中加入200 U本品，以500 ng Hela cell total RNA为模板，Oligo(dT)23为引物，55 ºC反应45min。取10% cDNA产物进行PCR扩增Polε基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的4.8 kb (GC-rich)条带。
功能检测3：逆转录体系中加入200 U本品，以1 pg-1 μg Hela cell total RNA为模板，Oligo(dT)23VN和Random Hexamers为引物，测试qRT-PCR 性能。以6个数量级的模板量的对数值对Ct值做标准曲线，R2>0.990，斜率在-3.20到-3.60之间。

准备工作
1. 防止RNase污染：请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证RNase free。
2. 引物选择：
2.1 后续实验为PCR
a, 如果模板为真核生物来源，一般情况下首选Oligo dT18，与真核生物mRNA的3’Poly A尾配对，可获得最高产量的全长cDNA。
b, 基因特异性引物 (GSP)的特异性最高。但有些情况下，用于PCR反应的GSP无法有效引导第一链cDNA合成。这时，可改用Oligo dT18或Random hexamers重新进行逆转录。
c, Random hexamers特异性最低，所有RNA，包括mRNA, rRNA, tRNA均可以作为Random hexamers的模板。当目标区域具有复杂二级结构或GC含量较高，或者模板为原核生物来源，使用Oligo dT18或基因特异性引物 (GSP)无法有效引导cDNA合成时，可使用Random hexamers为引物。
2.2 后续实验为qPCR
a, 将Oligo dT18与Random hexamers混合使用，可使mRNA的各个区域均能以相同效率引发cDNA合成，有助于提高定量结果的重复性。

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·0.5 M Tris-HCl缓冲液(pH 6.8)(无菌)
编号：SY0368
英文名称：0.5 M Tris-HCl, pH 6.8, Sterile
规格：250ml
0.5 M Tris-HCl, pH 6.8，一种常用缓冲液，常用于分子生物学和蛋白质研究中，如可用于配制SDS-PAGE浓缩胶，本品经HCl调pH至6.8。本品已经高压灭菌处理，可直接稀释用于所需要浓度。

储存条件：室温。

·10×Tris-Glycine Native电泳缓冲液
编号：SY0364
英文名称：10×Tris-Glycine Native Running Buffer
规格：500ml
本缓冲液是10倍浓缩液，在使用前只需用去离子水稀释到1×工作液即可。Tris-Glycine Native 电泳缓冲液，即Tris-Glycine Native Running Buffer，即可用作天然Tris-甘氨酸凝胶（不含SDS）的电泳缓冲液，也可用于制备标准的Western Blot电转缓冲液。

Tris-Glycine Native Running Buffer [1×]:25 mM Tris, 192 mM Glycine, pH 8.5。

储存条件：室温

·BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)
编号：SY0298
英文名称：BCA Protein Quantification Kit
规格：500T
该BCA蛋白浓度测定试剂盒可用于比色皿法检测，也可用于微孔板法检测。前者虽需较大量（100μl）的蛋白样品，但由于其在检测中使用蛋白样品与BCA工作液的比率为1:20（v/v），从而降低干扰物质带来的影响。后者操作简单方便，仅需少量（10-25μl）的蛋白样品。不过，由于其在检测中使用蛋白样品与BCA工作液的比率为1:8（v/v），某种程度上限制干扰物质的承受浓度以及降低最低检测水平。我司提供三种规格的BCA蛋白浓度检测试剂盒，比色皿法分别可做50次，250次，500次。酶标法分别可做500次，2500次，以及5000次。

BCA（Bicinchoninic acid）法是目前应用比较广泛的蛋白质浓度测定方法。基于双缩脲反应，即在碱性环境下蛋白质将Cu2+还原成Cu+，产生一种紫蓝色复合物，在562nm处有高的吸光值，该反应产物的量与蛋白质浓度成正比。BCA蛋白浓度测定法实现了蛋白质浓度测定的简便、灵敏、快速和稳定性。试剂盒中提供的蛋白标准品为用户制作标准曲线提供了便利。


产品特点

1)灵敏度高，最小检测蛋白量可达0.2μg，检测浓度下限达到10μg/ml。
2)速度快，比一般的BCA蛋白浓度测定试剂盒显色所用时间短。比传统的Lowry法检测速度约快4倍。
3)线性范围广，20-2000μg/ml浓度范围内有较好的线性范围。
4)不受大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20，60，80等。

储存条件：室温，有效期一年。

注意事项
1)使用BCA蛋白测定法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，因此需注意保持定时和定温，以确保精确定量。
2)低温或长期保存，若发现BCA试剂A或者试剂B有沉淀发生。请37ºC温育并伴随搅拌促使其充分溶解。如发现细菌污染，则应丢弃，避免对实验结果造成影响。
3)实验操作规范，提高上样量的精确度。
4)每次测定都需做相应的标准曲线，因为显色反应与温度和时间的变化有关，精准的蛋白定量宜每次都做标准曲线。

操作方法

一、配制标准品和工作液
1. 配制BSA标准品体系
注：标准品稀释液为蛋白样品的溶解液，原则上蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS进行稀释。
BSA标准品体系配制可参考表一。

Vial	稀释液体积(μl)	2mg/ml BSA体积(μl)	BSA终浓度(μg/ml)
A	0	100	2000
B	25	75	1500
C	50	50	1000
D	125	75	750
E	150	50	500
F	350	50	250
G	375	25	125
H	395	5	25
I	400	0	0=Blank
表一BSA标准品体系配制（微孔板检测，线性范围20-2000μg/ml）*

*如用比色皿检测，每管需加100μl标准品，按3个重复计算，每个浓度至少需配制300μl。

2. 配制BCA工作液

1)计算所需要的总BCA工作液体积。
总BCA工作液体积=（标准品+待测样品）×重复数×每个样品所需要的BCA工作液
注：比色皿检测时每个样品加2.0ml BCA工作液，微孔板检测每个样品加200μl BCA工作液。

2)配制BCA工作液：50体积的BCA试剂A中加入1体积的BCA试剂B（A:B=50:1） ，充分混匀。
注：BCA试剂B加入BCA试剂A中后，迅速浑浊，通过混匀后立即变澄清。BCA工作液装入密封容器内，室温条件24h稳定。

二、检测方法

1. 比色皿检测方法（样品：BCA工作液=1:20）
1)各取100μl标准品和待测样品加入到反应管中。
2)每管加入2.0ml BCA工作液，混匀。37℃孵育30min。
注意：也可室温孵育2h，或者60℃孵育30min。BCA检测蛋白浓度，延长孵育时间会加深颜色反应。升高温度会加快显色反应。但是温度升高和时间延长会降低检测下限，以及降低工作线性范围。若蛋白浓度很低，可在较高温度孵育或者适当延长孵育时间。
3)冷却到室温。在分光光度计上进行检测，设定波长为562nm。用装满水的比色皿对仪器校零。然后在10分钟内对所有样品读数。
注意：由于BCA反应达不到真正的反应终点，即使温度降低至室温生色反应液会继续。但是，由于室温下生色比率相当低，因此若是10min内能对所有的样本进行562nm吸光度的测试，不会导致明显错误。
4)根据BSA标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数），绘制标准曲线（X-蛋白浓度ug/ml；Y-最终的OD562nm）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。

2. 微孔板检测方法（样品：BCA工作液=1:8）
1)各取25μl标准品和待测样品加入到微孔板中。
注：样品与工作液比例为1:8，若样品有限，可使用10μl标准品和待检测样品进行检测（即1:20），这时试剂盒的检测范围为125-2000μg/ml。

2)每孔加入200μl BCA工作液，振荡30s充分混匀。盖上微孔板，37℃孵育30min。
3)冷却到室温，在酶标仪上的540～595nm波长范围处检测吸光度，其中562nm波长为最佳。

注意：
a）由于酶标板的光径比比色皿短，使得酶标板检测需要更好的样品：BCA工作比率来获得相同的检测灵敏度。若使用高于562nm的检测波长，建议延长孵育时间到2h。
b）延长孵育时间或者提高样品：BCA工作比会增高每个孔的OD562nm净值，并且降低检测下限和工作线性范围。
4)根据BSA标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数），绘制标准曲线（X-蛋白浓度ug/ml；Y-最终的OD562nm）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。

附录：
表：BCA蛋白浓度测定的兼容性

名称	耐受浓度
Sodium bicarbonate	100 mM
Sodium phosphate	25 mM
2-Mercaptoethanol	0.01%
Glycercol (pure)	10%
Glycine-HCl, pH 2.8	100 mM
HEPES	100 mM
Hydrochloric acid	100 mM
Leupeptin	10 mg/L
Nickel chloride (in TBS, pH8.0)	10 mM
Nonidet P-40 (NP-40)	5% (w/v)
Octyl β -glucoside	5% (w/v)
Potassium thiocyanate	3.0 M
SDS	5%
Sodium acetate, pH 4.8	200 mM
Sodium azide	0.20%
Sodium hydroxide	100 mM
Sucrose	40%
Triton X-100	5%
Triton X-114, X-305,X-405	1%
Tween-20, Tween-60, Tween-80	5%
Zwittergent	1%
ACES, pH 7.8	25 mM
Acetone	10%
Acetonitrile	10%
Ammonium sulfate	1.5 mM
Aprotinin	10 mg/L
Bicine, pH 8.4	20 Mm
Bis-Tris, pH 6.5	33 mM
Borate, pH 8.5	50 mM
Brij-35	5%
Brij-52	1%
Brij-56, Brij-58	1%
BugBuster protein Extraction Reagent	no interference (undiluted)
Calcium chloride (in TBS, pH 8.0)	10 mM
CelLytic B Reagent	no interference (undiluted)
Cesium bicarbonate	100 mM
CHAPS	5%
Cobalt chloride (in TBS, pH 8.0)	0.8 mM
CytoBuster Protein Extraction Reagent	no interference (undiluted)
Deoxycholic acid	5%
Dithioerythritol (DTE)	1 mM
Dithiothreitol (DTT)	1 mM
DMF	10%
DMSO	10%
EDTA	10 mM
EPPS, pH 8.0	100 mM
Ethanol	10%
Ferric chloride (in TBS, pH 8.0)	10 mM
Glucose	10 mM
Glycerol	10%
Guanidine-HCl	4 M
Imidazole, pH 7.0	50 mM
MES, PH6.1	100mM
Methanol	10%
MOPS, pH7.2	100mM
N-Acetyglucosamine(10mM)in PBS, pH7.2	10mM
Octyl β- thioglucpyranoside	5%
PIPES, pH6.8	100mM
PMSF	1 mM
PopCulture Reagent (Cat. No. 71092)	no interference (undiluted)
Reportasol Extraction Buffer	no interference (undiluted)
Sodium chloride	1 M
Sodium citrate, pH 4.8 or pH 6.4	200 mM
Sodium ortho-vanadate in PBS, pH7.2	1mM
Span 20	1%
TBS (150 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl, pH 8.0)	no interference (undiluted)
Thimerosal	0.01%
TLCK	0.1mg/L
TPCK	0.1mg/L
Tricine, pH 8.0	25 mM
Triethanolamine, pH 7.8	25 mM
Tris	250 mM
Tris(hydroxypropyl)phosphine (THP)	1 mM
Urea	3M
Zinc chloride (in TBS, pH 8.0)	10 mM

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·PU.1-GFP报告基因质粒
编号：SY0201
英文名称：PU.1 GFP Reporter Plasmid
规格：1μg
PU.1-GFP报告基因是用于检测PU.1转录活性水平为目的的报告基因。PU.1转录因子因其DNA结合区识别共有序列GAGGAA，故该区又被称为PU.1 box。PU.1主要在造血系统如髓细胞和B淋巴细胞中表达，调节关键髓系基因的转录从而调控造血系统的分化。

PU.1-GFP报告基因主要用于检测细胞中PU.1信号通路、药物研究、基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMPU.1-GFP是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个PU.1结合位点，可以高效地检测PU.1的激活水平。由于载体采用了GFP作为报告基因，更便于后续的检测。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。另外，由于质粒体积减小，使得PU.1-GFP报告基因更易于转染。

质粒图谱



pGM PU.1 -GFP质粒测序引物
5’-TAGCAAAATAGGCTGTCCC-3’

使用说明
pGMPU.1-GFP可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。

注意事项
1）本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
2）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

储存条件：-20℃。


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RP202 PCR Enhancer
桔霉素 Glycerol phosphate oxidase 518-75-2
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胞苷 Murexide 65-46-3
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焦磷酸四苄酯 Triisoamylamine 990-91-0
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PY02-033 煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB) 250克
ARB13483 鸡细胞间粘附分子-1(ICAM-1)Elisa分析 Chicken intercellular adhesion molecule 1,icam-1 ELISA KIT
657-27-2 L-Lysine L-赖氨酸盐酸盐
酰基辅酶A氧化酶 L-Methionine ethyl ester hydrochloride 61116-22-1
SJ0288 Fluorescein 荧光素(荧光黄)
ARB12981 小鼠抑制素A(INH-A)含量检测 Mouse inhibin,inh-a ELISA KIT
9000-70-8 明胶 Gelatin

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