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- DSMZ细胞
- 美国/德国/日本
- ACC--3021
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-80℃冻存
- 保质期：
二年
- 英文名：
MADB106
- 库存：
20
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 规格：
1x10^6 cells
细胞英文(简称）:MADB106
细胞来源: ATCC DSMZ JCM ECACC
代次:P3
规格:T25
细胞数:1x10^6 cells
组织来源:乳腺癌
细胞形态:贴壁；上皮细胞样
细胞活力:95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
细胞检测细胞不含有:HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
培养条件:DMEM(高糖) +10% FBS；37℃，5% CO2
传代方法建议:1:2-1:3 两天换液一次
冻存条件:90%FBS+10%DMSO
传代细胞培养操作步骤
1、 37度水浴加热所有试剂。
2、 吸取培养培养皿内旧培养液，放置一个干净离心管内。（为稍后终止消化作准备。）
3、 用PBS清洗培养皿，弃去。
4、 向瓶内加入消化液（胰蛋白酶液）。以能覆盖培养瓶底为宜。（一般一个大皿1ml）
5、 2-5分钟后，轻轻震荡培养皿。使MADB106大鼠乳腺癌细胞从瓶壁脱离形成细胞悬液。显微镜下观察若细胞由贴壁变为悬浮就加入血清（即原培养液）终止消化。
6、 收集细胞悬液，880转/分、5分钟离心，弃去上清液。
7、 加培养液至1ml，混匀后取10ul计数细胞。
8、 根据实验要求取适量细胞留种或接种于新的培养皿或96孔板、24孔板中，再加入相应体积的培养液。（90mm大皿是9ml，中皿好像是4mm，6孔板和小皿是2ml，96孔板是100ul）。
9、 接种好的培养皿顺时针和逆时针各转三圈，使细胞排列均匀。
10、 放入暖箱中继续培养。
细胞计数步骤：
1、将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板上.
2、将细胞悬液吸出少许，用台盼兰溶液对被稀释后滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。(台盼兰用于标记死亡细胞。)
3、镜下观察，计算计数板八大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算：
细胞数/ml＝8大格细胞总数/ 8×2×10000
细胞冻存与复苏：
MADB106大鼠乳腺癌细胞冻存和复苏的原则：慢冻快融
当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。
如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶很大，大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。
1．冻存细胞
（1）选对数增生期细胞，在冻存前1d换液。
（2）按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达5×106／m1左右密度，离心，去上清。
（3）加入配制好的冻存液（培养液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml），按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞成再悬液。冻存细胞时培养液中加入保护剂10％二甲基亚砜(DMSO) 或甘油，它是一种渗透性保护剂，可迅速透入细胞，提高胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤
（4）分装于无菌冻存管中，每管加1.5m1悬液。
（5）旋好冻存管并仔细检查，一定要盖紧，作好标记。
（6）冻存：在特殊的仪器或简易的液氮容器中，按-1℃／min的速度,在30～40 min时间内,下降到液氮表面，再停30 min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。
标准程序：
当温度在-25℃以上时， 1～2℃/min
当温度达-25℃以下时， 5～10℃/min
当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中
简易程序：
将冷冻管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1～2℃的速度，在40分钟内降至液氮表面，停30分钟后，直接投人液氮中。
操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。
2. 复苏细胞
（1）从罐中取出冻存管。
（2）迅速放入37℃水浴，不时摇动，使其急速融化，30～60s内完成。
（3）冻存管用70％酒精擦拭消毒后,打开盖子,用吸管将细胞悬液注入离心管中,再滴加10 m1培养液。
（4）MADB106大鼠乳腺癌细胞低速离心(880r／min) 5 min，去上清后再用培养液洗一次。
（5）用培养液适当稀释后，装入培养瓶37℃培养，次日更换一次培养液后，继续培养。以后仍按常规进行培养。
冻存细胞数量要充分，密度应达到107／m1，在融后稀释20倍后，仍能保持5×105／m1数量。
| ECACC细胞库 | 86072805 | II b | 89072615 | ICR-2A | 92020421 | SJMRF | 95041316 | RPMI 8866 | 6020201 | VCaP |
| ECACC细胞库 | 86080602 | CL 21 | 89072703 | EB (JC) | 92020422 | MDA-MB-157 | 95050229 | Ampli-GPE | 6041201 | LA-N-1 |
| ECACC细胞库 | 86082104 | Hs 578T | 89072704 | EB176 (JC) | 92020423 | MDA-MB-361 | 95050415 | NCI-H929 | 6041203 | LA1-55n |
| ECACC细胞库 | 86082105 | CMT64/61 | 89072705 | EB185 (JC) | 92020424 | MDA-MB-231 | 95051030 | MES-SA | 6092007 | H413 |
| ECACC细胞库 | 86082106 | CMT93/69 | 89081402 | U-87 MG | 92021401 | HT2 Clone A5E | 95051031 | MES-SA/Dx-5 | 6072611 | 833KE |
| ECACC细胞库 | 86082107 | 3.334 SC5/8 | 89081802 | 59M | 92022711 | U-2 OS | 95051033 | My-La CD8+ | 6101702 | KARPAS 422 |
| ECACC细胞库 | 86082802 | Detroit 551 | 89090402 | AGS | 92030501 | K1 | 95051229 | X1/5 | 6100302 | KARPAS 417 |
| ECACC细胞库 | 86082803 | BeWo | 89090404 | SIRC | 92030502 | RO82-W-1 | 95060212 | CCO | 7042701 | PNT2 (SERUM FREE) |
| ECACC细胞库 | 86090201 | HeLa229 | 89090405 | CCRF-SB | 92031915 | COR-L47 | 95060901 | IMT 9 | 7021401 | C22 (Clara) |
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日可以离乳。2、大鼠的寿命一般为2.5～3年。杂交群、远交群比近交系寿命长。3、不同品种、品系的大鼠体重有差别，同一品种大鼠雄性比雌性体形大。下表为Wistar和SD大鼠体重与日龄的关系。4、雄性大鼠成年后生殖器突出，离肛门较远。雌性外生殖器有明显的凹沟。成年大鼠雄性体重为300～600g，雌性为250～500g。 成年体重：雄300～600g；雌250～500g 寿命：2.5～3年 体温：37.5～38.7℃ 染色体：42条 妊娠期：21天 出生体重：5～6g 采食量：5g
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
