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- DSMZ细胞
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- ACC--1607
- 2025年07月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-80℃冻存
- 保质期：
二年
- 英文名：
MCF10A;MCF-10A
- 库存：
20
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 规格：
1x10^6 cells
细胞英文(简称）:MCF10A;MCF-10A
细胞来源: ATCC DSMZ JCM ECACC
代次:P3
规格:T25
细胞数:1x10^6 cells
组织来源:乳腺
细胞形态:贴壁
细胞活力:95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
细胞检测细胞不含有:HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
培养条件:DMEM(高糖) +10% FBS；37℃，5% CO2
传代方法建议:1:2-1:3 两天换液一次
冻存条件:90%FBS+10%DMSO
传代细胞培养操作步骤
1、 37度水浴加热所有试剂。
2、 吸取培养培养皿内旧培养液，放置一个干净离心管内。（为稍后终止消化作准备。）
3、 用PBS清洗培养皿，弃去。
4、 向瓶内加入消化液（胰蛋白酶液）。以能覆盖培养瓶底为宜。（一般一个大皿1ml）
5、 2-5分钟后，轻轻震荡培养皿。使MCF10A;MCF-10A；人正常乳腺上皮细胞从瓶壁脱离形成细胞悬液。显微镜下观察若细胞由贴壁变为悬浮就加入血清（即原培养液）终止消化。
6、 收集细胞悬液，880转/分、5分钟离心，弃去上清液。
7、 加培养液至1ml，混匀后取10ul计数细胞。
8、 根据实验要求取适量细胞留种或接种于新的培养皿或96孔板、24孔板中，再加入相应体积的培养液。（90mm大皿是9ml，中皿好像是4mm，6孔板和小皿是2ml，96孔板是100ul）。
9、 接种好的培养皿顺时针和逆时针各转三圈，使细胞排列均匀。
10、 放入暖箱中继续培养。
细胞计数步骤：
1、将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板上.
2、将细胞悬液吸出少许，用台盼兰溶液对被稀释后滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。(台盼兰用于标记死亡细胞。)
3、镜下观察，计算计数板八大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算：
细胞数/ml＝8大格细胞总数/ 8×2×10000
细胞冻存与复苏：
MCF10A;MCF-10A；人正常乳腺上皮细胞冻存和复苏的原则：慢冻快融
当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。
如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶很大，大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。
1．冻存细胞
（1）选对数增生期细胞，在冻存前1d换液。
（2）按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达5×106／m1左右密度，离心，去上清。
（3）加入配制好的冻存液（培养液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml），按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞成再悬液。冻存细胞时培养液中加入保护剂10％二甲基亚砜(DMSO) 或甘油，它是一种渗透性保护剂，可迅速透入细胞，提高胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤
（4）分装于无菌冻存管中，每管加1.5m1悬液。
（5）旋好冻存管并仔细检查，一定要盖紧，作好标记。
（6）冻存：在特殊的仪器或简易的液氮容器中，按-1℃／min的速度,在30～40 min时间内,下降到液氮表面，再停30 min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。
标准程序：
当温度在-25℃以上时， 1～2℃/min
当温度达-25℃以下时， 5～10℃/min
当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中
简易程序：
将冷冻管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1～2℃的速度，在40分钟内降至液氮表面，停30分钟后，直接投人液氮中。
操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。
2. 复苏细胞
（1）从罐中取出冻存管。
（2）迅速放入37℃水浴，不时摇动，使其急速融化，30～60s内完成。
（3）冻存管用70％酒精擦拭消毒后,打开盖子,用吸管将细胞悬液注入离心管中,再滴加10 m1培养液。
（4）MCF10A;MCF-10A；人正常乳腺上皮细胞低速离心(880r／min) 5 min，去上清后再用培养液洗一次。
（5）用培养液适当稀释后，装入培养瓶37℃培养，次日更换一次培养液后，继续培养。以后仍按常规进行培养。
冻存细胞数量要充分，密度应达到107／m1，在融后稀释20倍后，仍能保持5×105／m1数量。
| DSMZ细胞库 | ACC 416 | C7 | ACC 243 | SAOS-2 | ACC 725 | KHYG-1 | ACC 600 | HNT-34 | ACC 500 | MEC-2 |
| DSMZ细胞库 | ACC 564 | EN | ACC 617 | SCC-25 | ACC 83 | DG-75 | ACC 58 | WSU-NHL | ACC 136 | KB |
| DSMZ细胞库 | ACC 112 | F9 | ACC 419 | MFE-296 | ACC 376 | T-24 | ACC 661 | UPCI-SCC-172 | ACC 134 | EM-3 |
| DSMZ细胞库 | ACC 587 | 7926 | ACC 448 | CAL-62 | ACC 625 | BL-2 | ACC 663 | UPCI-SCC-116 | ACC 269 | DMBM-2 |
| DSMZ细胞库 | ACC 565 | C2C12 | ACC 31 | KARPAS-299 | ACC 7 | CML-T1 | ACC 475 | CAT-13.9C1 | ACC 51 | DA-1 |
| DSMZ细胞库 | ACC 675 | LS | ACC 198 | COLO-704 | ACC 63 | COS-1 | ACC 388 | LCLC-97TM1 | ACC 411 | 32D |
| DSMZ细胞库 | ACC 106 | MH1C1 | ACC 82 | MC-116 | ACC 285 | TI-1 | ACC 72 | L-540 | ACC 615 | GF-D8 |
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文献和实验Nature 深度剖析：管坤良与 Alj 组研究成果为何截然相反，Hippo 通路调控乳腺癌的两面性
1/2，可能会造成不同实验结果。作者猜测，敲除 LATS1/2 带来的 YAP/TAZ 异常持续活化可能对细胞状态有较大的改变，从而使细胞启动某些不为人知的代偿通路以维持稳态，从而改变了 Hippo 通路对 ERα 的调控模式。此外，在 LATS1/2 过表达实验中，Alj 组使用的是瞬间转染，而管组使用的是稳定转染，作者认为这或许会带来一定差异。 2. 其次，双方使用的细胞培养条件有部分不同。Bentires-Alj 组使用的是 M5 培养基培养 PHBECs 和 MCF10A 细胞，鉴于这一培
breast epithelial MCF-10A cells. 科学问题：双酚 S (BPS) 与双酚 A (BPA) 具有相似的雌激素效应。考虑到 BPS 的内分泌干扰效应，本研究采用基于质谱的代谢组学和定量蛋白质组学方法，研究了 BPS 对正常人乳腺上皮细胞株 MCF-10A 的影响。 研究内容 表型实验：暴露于 BPS 达 24 小时后，MCF-10A 细胞的增殖以一种刺激的方式发生改变，在剂量为 1μM 时增殖率最高。 蛋白质组分析：总共有 200 种蛋白质被鉴定为在暴露于 BPS
MCF―10A、HBLl00、MCF―7和MDA―MB―231中，14―3―3σ基因CpG岛是非甲基化的，而在Hs578t和MDA―MB―435中却是完全甲基化的。体外实验表明，用5―氮杂―2―脱氧胞苷处理14―3―3。基因失活的细胞可恢复其表达，这更进一步说明14―3―3σ基因表达沉默与其CpG岛甲基化密切相关。此外，6个正常乳腺上皮活检标本都未发生甲基化，而32例乳腺癌的活检标本14―3―3σ基因都发生甲基化。这些研究结果表明，乳腺癌中14―3―3σ基因的表达缺失与甲基化密切相关。
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