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- DSMZ细胞
- 美国/德国/日本
- ACC--1583
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-80℃冻存
- 保质期：
二年
- 英文名：
HEPG2.2.15
- 库存：
20
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 规格：
1x10^6 cells
细胞英文(简称）:HEPG2.2.15
细胞来源: ATCC DSMZ JCM ECACC
代次:P3
规格:T25
细胞数:1x10^6 cells
组织来源:肝
细胞形态:贴壁
细胞活力:95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
细胞检测细胞不含有:HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
培养条件:DMEM(高糖) +10% FBS；37℃，5% CO2
传代方法建议:1:2-1:3 两天换液一次
冻存条件:90%FBS+10%DMSO
传代细胞培养操作步骤
1、 37度水浴加热所有试剂。
2、 吸取培养培养皿内旧培养液，放置一个干净离心管内。（为稍后终止消化作准备。）
3、 用PBS清洗培养皿，弃去。
4、 向瓶内加入消化液（胰蛋白酶液）。以能覆盖培养瓶底为宜。（一般一个大皿1ml）
5、 2-5分钟后，轻轻震荡培养皿。使HEPG2.2.15；表达HBV病毒的人肝细胞从瓶壁脱离形成细胞悬液。显微镜下观察若细胞由贴壁变为悬浮就加入血清（即原培养液）终止消化。
6、 收集细胞悬液，880转/分、5分钟离心，弃去上清液。
7、 加培养液至1ml，混匀后取10ul计数细胞。
8、 根据实验要求取适量细胞留种或接种于新的培养皿或96孔板、24孔板中，再加入相应体积的培养液。（90mm大皿是9ml，中皿好像是4mm，6孔板和小皿是2ml，96孔板是100ul）。
9、 接种好的培养皿顺时针和逆时针各转三圈，使细胞排列均匀。
10、 放入暖箱中继续培养。
细胞计数步骤：
1、将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板上.
2、将细胞悬液吸出少许，用台盼兰溶液对被稀释后滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。(台盼兰用于标记死亡细胞。)
3、镜下观察，计算计数板八大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算：
细胞数/ml＝8大格细胞总数/ 8×2×10000
细胞冻存与复苏：
HEPG2.2.15；表达HBV病毒的人肝细胞冻存和复苏的原则：慢冻快融
当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。
如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶很大，大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。
1．冻存细胞
（1）选对数增生期细胞，在冻存前1d换液。
（2）按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达5×106／m1左右密度，离心，去上清。
（3）加入配制好的冻存液（培养液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml），按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞成再悬液。冻存细胞时培养液中加入保护剂10％二甲基亚砜(DMSO) 或甘油，它是一种渗透性保护剂，可迅速透入细胞，提高胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤
（4）分装于无菌冻存管中，每管加1.5m1悬液。
（5）旋好冻存管并仔细检查，一定要盖紧，作好标记。
（6）冻存：在特殊的仪器或简易的液氮容器中，按-1℃／min的速度,在30～40 min时间内,下降到液氮表面，再停30 min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。
标准程序：
当温度在-25℃以上时， 1～2℃/min
当温度达-25℃以下时， 5～10℃/min
当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中
简易程序：
将冷冻管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1～2℃的速度，在40分钟内降至液氮表面，停30分钟后，直接投人液氮中。
操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。
2. 复苏细胞
（1）从罐中取出冻存管。
（2）迅速放入37℃水浴，不时摇动，使其急速融化，30～60s内完成。
（3）冻存管用70％酒精擦拭消毒后,打开盖子,用吸管将细胞悬液注入离心管中,再滴加10 m1培养液。
（4）HEPG2.2.15；表达HBV病毒的人肝细胞低速离心(880r／min) 5 min，去上清后再用培养液洗一次。
（5）用培养液适当稀释后，装入培养瓶37℃培养，次日更换一次培养液后，继续培养。以后仍按常规进行培养。
冻存细胞数量要充分，密度应达到107／m1，在融后稀释20倍后，仍能保持5×105／m1数量。
| ECACC细胞库 | 88031601 | Ptk2 | 90102539 | VH2 | 93112519 | A2780 | 98062329 | LB205 | 97051411 | 293-PERV-PK-CIRCE |
| ECACC细胞库 | 88031602 | RPMI 2650 | 90102540 | DLD-1 | 93112520 | A2780ADR | 98062330 | LB253 | 97062513 | PE/CA-PJ34 (clone C12) |
| ECACC细胞库 | 88031603 | CRI-G5 | 90102541 | LL86 (LeSa) | 93112521 | K562 AZQR | 98062331 | LB277 | 98062337 | LB708 |
| ECACC细胞库 | 88031604 | CRI-D11 | 90102543 | SW 1417 | 93120108 | HTC | 98062333 | LB316 | 98062338 | LB823 |
| ECACC细胞库 | 88031605 | CRI-D2 | 90110101 | MOUSE L CELLS (TK+, HBS Ag+) | 93120214 | R9 | 98062335 | LB687 | 98070106 | HL60 |
| ECACC细胞库 | 88031701 | COS-1 | 90110501 | MC116 | 93120215 | R74 | 98062336 | LB707 | 98070109 | BHL-89 |
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文献和实验复制，但不能阻止病毒感染和 cccDNA 合成。此外，体内移植表明，HepaRG 细胞对裸鼠未显示明显的致瘤性。移植到 Alb-uPA/SCID 小鼠体内，仍然保持了分化功能，并具有成熟肝细胞的生物学特性。综上所述，HepaRG 是具有独特生物学特性的人肝细胞株。不但能表达正常肝细胞相关的 I 相和 II 相药代酶，在体外研究药物代谢和毒性机制中发挥作用，而且还能感染 HBV，可用于体外肝炎病毒分子机制的研究，很有希望成为原代人肝细胞的替代物。同时，HepaRG 细胞相比原代人肝细胞，还具有异于后者的优势
淋巴细胞?)增殖?呈剂量依赖性反应 实施例53说明--合成疫苗可诱导肝炎病人(急、慢)的T淋巴细胞向Th1、Th2型转化，以Th1型转化最为明显 实施例54说明--合成疫苗能够诱导T淋巴细胞特异性杀伤HepG2.2.15、肽预包被的T2、E6细胞，急肝恢复期病人溶破率可达68.6%，慢性肝炎患者可达42.6% 实施例55说明--同实施例46 实施例56说明--合成疫苗在HBV-DNA转基因活鼠体内可诱发T淋巴细胞的Th1型转化 实施例57说明--合成疫苗可在转基因活鼠内诱导CTL
djia 哪里可购买HBV的动物模型或细胞模型，，，请问。。。。 谁有相关说明书。。。。。 非常感谢啊。。。 Bobo_yo HBV的动物模型有禽类和哺乳动物的，但考虑到生物学分类要与人类相近，认为哺乳动物模型比较好。小鼠模型有把HBVDNA注射到小鼠肝脏的，有把乙肝病人的肝脏移植到小鼠体内的，有把人肝细胞移植到小鼠体内的，但是用这几种方法获得的动物模型体内HBVDNA不能长期、稳定表达。还有一种
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