北京现货分散酶II特价优惠

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销售北京现货分散酶II特价优惠，我公司供应的培养基品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货分散酶II特价优惠
规格：100mg
产地：国产|进口
英文名：Dispase II
品牌：百奥莱博
编号：SY0513
Dispase II，中文名分散酶II，一种非特异性金属蛋白酶，细胞生物学中常用于从不同的组织或器官分离单细胞，并用于后续细胞培养，如原代细胞的分离，细胞传代等。另外，Dispase II还可用于消除悬浮细胞培养过程中发生的细胞聚集。与其他细胞生物学常用蛋白酶（如胰蛋白酶、胶原酶、链霉蛋白酶等）相比，该酶具有以下优势：1）一种快速有效且温和的细胞消化酶，对细胞损伤小，且能维持细胞膜完整性；2）来源于细菌，无支原体或其他动物病毒污染；3）稳定性强，不受温度、pH及血清组分的影响；4）可用于多种类型组织和细胞的分离等。

本品非无菌Dispase II，来源于Bacillus polymyxa，使用时需对其除菌处理，用于细胞培养时常用工作浓度为0.6-2.4U/ml。

比活性：≥0.8U/mg (+37℃, casein as substrate, pH 7.5)
单位定义：在温度37℃、pH值为7.5的条件下，每分钟水解酪蛋白释放出相当于1µM(181µg)酪氨酸的福林阳性氨基酸和肽所需要的酶量，即为一个蛋白酶活性单位，以U表示。
最佳pH：6.0-8.5
抑制剂：EDTA, EGTA, Hg2+, 其他金属离子。血清不会抑制dispase活性。
激活剂（Activator）：Ca2+，Mg2+，Mn2+，Fe2+，Fe3+，Al3+。最佳的Ca2+浓度为2mM。本酶制品已含足量的Ca2+使其处于最佳活性。
储存条件：4℃

北京现货分散酶II特价优惠极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·总RNA提取试剂(同Trizol)
编号：SY0269
英文名称：Total RNA Extraction Reagent
规格：100ml
本产品是一种用于各种动植物、细菌组织/细胞总RNA抽提的试剂，具有极强的裂解能力，可在短时间内裂解细胞和组织样本，保持样品中RNA的完整性，有效抑制RNA的降解。样品在该试剂中能够充分被裂解，在加入氯*(代"仿")离心后，溶液会形成上清层、中间层和有机层 (鲜红色下层)，RNA分布在上层水相中，收集上清层后，经异丙醇沉淀便可回收得到Total RNA。提取的总RNA纯度高，基本不含蛋白质及基因组DNA， 可直接用于Northern、点杂交、mRNA纯化、体外翻译、RT-PCR、poly(A)+选择、RNA酶保护分析以及构建cDNA文库等多种分子生物学实验。

此外，在除去水样层后，样品中的DNA和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA，在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。

本品操作简单快速，所有操作可以在一小时内完成。且对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>107)均有较好的裂解效果。

注意事项

1）需自备氯*(代"仿")、异丙醇（新开封或提取RNA专用）、75%乙醇 (DEPC水配制)、DEPC和DEPC水。
2）戴一次性干净手套；在单独的洁净的区域操作；在操作过程中避免讲话，以防实验者汗液、唾液中的RNase的污染。
3）请尽量使用RNase free的实验器具，包括枪头和离心管。耐高温器物可150℃烘烤4小时以去除RNA酶，其它器物去除RNA酶可考虑用0.1% 的DEPC水浸泡过夜，然后灭菌，烘干。溶液需用DEPC水配制。RNA实验用的器具和试剂应专门使用，不要用于其它实验。DEPC水建议分装后保存。
4）本产品中含有苯酚，具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会中毒、导致灼伤以及其他身体伤害。使用本产品时应穿戴防护物品，如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛时，应立即用大量的水冲洗以及前往医院治疗；
5）样品用Total RNA Extraction Reagent 匀浆后，如果不即刻加入氯*(代"仿")进行下游实验，可先于-70℃下冻存，可保存一个月以上。另保存在75%乙醇中的RNA沉淀，可于4℃保存1周，-20℃保存1年。
6）RNA半衰期比较短，易降解，建议抽提后尽快进行后续实验。

储存条件：4℃，避光，有效期一年。

参考用量

表1 每1 ml Total RNA Extraction Reagent 能够充分裂解的最大样本量如下：

贴壁细胞	10 cm2培养面积
悬浮动植物细胞或酵母细胞	5×106-1×107个
细菌	107个
全血	50 μl
动物组织	30-100 mg
植物组织 (多糖和多酚含量不高的)	50-100 mg

*过多的样本量可能会导致裂解不充分，并使产物纯度降低。


操作流程

1 样品的处理
1.1 样品的匀浆
A. 贴壁细胞
尽量弃去培养液，直接往直径3.5cm的培养板中加入1ml Total RNA Extraction Reagent 覆盖并反复吹打裂解细胞。
【注】：
1）依据培养板的面积而不是细胞的数量来决定所需的Total RNA Extraction Reagent 量（每10cm2 加1ml）。
2）当加入Total RNA Extraction Reagent量不足时可导致抽提的RNA有DNA污染。
3）贴壁培养细胞往往不能完全从培养瓶（皿）脱落，这并不意味着裂解不完全，此时细胞膜实际已经完全裂开，并已释放RNA，继续后续实验即可。

B. 悬浮细胞
离心收集细胞，每5×106～1×107个细胞加入1 ml Total RNA Extraction Reagent，用移液器反复吹打直至无明显颗粒样存在。
【注】：在加入Total RNA Extraction Reagent前避免洗涤细胞，否则会增加mRNA降解的可能性。裂解某些酵母和细菌可能需要使用匀浆器。

C. 动/植物组织
取新鲜动植物组织或-70℃冻存动物组织在液氮中充分研磨，按照表1加入适当量Total RNA Extraction Reagent 混匀。或取新鲜动植物组织尽量剪碎，加入适当Total RNA Extraction Reagent量，匀浆仪进行匀浆处理。
【注】：样品体积一般不要超过Total RNA Extraction Reagent体积的10%。
1.2 将匀浆样品剧烈震荡后在室温条件下放置5分钟以使核蛋白体完全解离。
1.3（可选）在4℃条件下，12000rpm 离心10min，取上清。
【注】：如样品中含有较多蛋白质、脂肪、多糖或肌肉，植物的块茎结节等可离心去除。离心后的沉淀中包含有细胞外膜、多糖以及高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织样品时，上层是大量油脂应尽量去除，取澄清的匀浆液进行后续实验。

2 总RNA提取
2.1 向上述裂解液中加入1/5体积的氯*(代"仿")。盖紧离心管盖，剧烈震荡15秒，室温静置2-3min。
2.2 12,000 rpm 4℃ 离心10-15分钟。
【注】:
1）离心后混合物可分3层：上层无色水样层，中间层，下层红色有机苯酚氯*(代"仿")层。RNA无一例外的存在于水样层中。
2）该部分容量大约为所加Total RNA Extraction Reagent 总量的50-60%。如用1 ml Total RNA Extraction Reagent提取，上层水相约为500-600 μl。建议吸取400-500 μl，不要吸的太完全，以防吸到中间层导致基因组污染。
3）有机相和中间层是蛋白和DNA，如有需要，请予以保留，并进行相关纯化实验。
2.3 小心吸取上层水相至一个新的离心管中，加入等体积的异丙醇。颠倒混匀后室温放置10min。（RNA沉淀在离心前通常不可见，离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。）
2.4 12,000rpm 室温或4℃ 离心10分钟。
2.5 小心弃去上清，加入1 ml用DEPC水配制的75%乙醇。充分洗涤管盖和管壁，并轻弹管底，让沉淀悬浮起来。每使用1ml Total RNA Extraction Reagent 用1ml 75%乙醇对沉淀进行洗涤。
2.6 12,000 rpm 室温或4℃ 离心3分钟，弃去上清，注意不要丢失RNA沉淀。
【注】：剩余的少量液体可短暂离心，然后用枪头吸出，注意不要吸弃沉淀。
2.7 室温放置2-3min，晾干。加入30-100ul RNase free water（DEPC水），待完全溶解后，取少量检测，其余在-70℃保存。

3 产物检测

A. 完整性检测
1）取1 μl RNA加入适当 10×DNA loading buffer，混匀。
2）进行1% 琼脂糖凝胶电泳。若能看见清晰的三条带，证明RNA完整性较好。
【注】：如果是普通的琼脂糖凝胶电泳，28S的位置大约在2kb，18S大约在1kb的位置，不同浓度的凝胶位置变化较大。

B. 纯度检测
检测260 nm，280 nm OD值，并计算OD 260/OD 280。纯的RNA的比值应在1.8-2.2之间。

应用举例
分别利用本品Trieasy和Trozol从胶质细胞中提取Total RNA，利用1%琼脂糖凝胶电泳检测，所提取RNA具有较好完整性， OD值均＞1.9。




北京现货分散酶II特价优惠关键词：分散酶II,Dispase II,SY0513


·RBP-JK萤火虫荧光素酶报告基因质粒
编号：SY0067
英文名称：RBP-JK luciferase reporter plasmid
规格：1μg
RBP-JK-Luc荧光素酶报告基因（报告基因质粒）（RBP-JK luciferase reporter plasmid）是用于检测RBP-JK转录活性水平为目的的报告基因。RBP-JK蛋白(CSL/CBF1/Su (H)/Lag1)是一种对Notch信号通路下游进行调控的转录因子。

RBP-JK报告基因主要用于检测细胞中Notch信号通路的活性、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMRBP-JK-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个RBP-JK结合位点，可以高灵敏度地检测RBP-JK的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小，使得RBP-JK报告基因更易于转染。

质粒图谱



注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

使用说明
pGMRBP-JK-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。

储存条件：-20℃。


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