10×CAPS电转移缓冲液(不含甘氨酸，适合大分子量蛋白转移

缓冲液配制指南

过硫酸胺 0.1 g ，加超纯水1.0 mL 溶解后，4 ℃ 保存，保存时间为 1 周。（-20 ℃长期保存） 30% 丙烯酰胺 溶于总体积为 50 mL 的水中，定容至 100 mL。室温保存于棕色瓶。 10× PBS（2L） NaOH 调 pH 值至 7.4，定容至 2 L。保存于室温。 还原型 5×SDS 上样缓冲液 混匀后，分装于 1.5 mL 离心管中，4 ℃ 可保存数周，-20 ℃ 可长期保存。 电泳液缓冲液 加蒸馏水溶解定容至 1000 mL 室温保存，1 次溶液可重复

蛋白免疫印迹（Western Blot）技术手册

对于大蛋白而言，其在凝胶电泳分离迁移较慢，而从凝胶转出也非常慢，因此对于这种大分子量蛋白应该用低浓度的凝胶，8%或更低，但因低浓度的胶非常易碎，所以操作时需十分小心， 2.大蛋白易在凝胶里形成聚集沉淀，因此；转膜时在电转移缓冲液加入终浓度为0.1%的SDS，以避免出现这种情况，甲醇易便SDS从蛋白上脱失，因此应降低电转移缓冲液中甲醇的浓度至10%或更低，以防止蛋白沉淀。 3.降低电转移缓冲液中甲醇的比例以促进凝胶的膨胀，易于大蛋白的转出。 4．如果使用PVDF，甲醇是必需

大分子蛋白总是转不下来？胶浓度、甲醇和转膜条件要一起调整

在其中迁移越困难。 可以先根据目标蛋白分子量选择起始条件： 这些范围用于确定预实验起点，不需要机械按分子量套用。实际还要结合蛋白本身迁移情况以及实验所用凝胶体系调整。   2. 条带一直挤在胶顶端，先改胶而不是先加抗体 如果大分子目标蛋白始终集中在分离胶顶部，说明当前跑胶条件本身就不理想。 这时即使提高一抗浓度、延长曝光时间，也不能解决蛋白仍然大量滞留在胶内的问题。应优先降低胶浓度、更换梯度胶，或者使用更适合超大分子量蛋白的凝胶体系。 图1｜不同凝胶体系对高分子蛋白分离及检测效果的影响