重组烟草蚀纹病毒蛋白酶

重组烟草蚀纹病毒蛋白酶

英文名：rTEV Protease
规格：1000U
重组型TEV蛋白酶（rTEV）是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶，不仅保持天然TEV酶的功能活性，且在广谱的温度范围内表现出更好的稳定性和特异性。rTEV是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶，具有很强的位点特异性，严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。普遍应用的七氨基酸序列为：Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。rTEV在pH 7.0，30℃时可达到最佳活性，但在pH 6.0-8.5和温度4-30℃的广泛范围内皆有活性（见表1），使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。另外rTEV切割后也能利用其N端的 6×His标签，通过Ni-NTA树脂去除，以达到纯化目的蛋白的目的。

表1. 不同温度下rTEV酶切活性

应时间 不同温度下剪切活性(%)
4℃ 16℃ 21℃ 30℃
1 h 34 58 56 70
2 h 58 80 78 90
3 h 71 99 99 99
3.5h 84 99 99 99


影响天然TEV酶活性的常见因素：1）PMSF和AEBSF（1 mM），TLCK（1 mM），Bestatin（1 mg/ml）、Pestatin A（1 mM），EDTA（1 mM）以及E-64（3 mg/ml），以上这些蛋白酶抑制剂对rTEV的活性没有影响；2）Zn离子（＞5 mM）对rTEV活性有抑制；3）与半胱氨酸反应的试剂也是rTEV的潜在抑制剂。

来源：大肠杆菌
外观：无色透明液体
比活力：5 U/μl
活性定义：在1×rTEV Buffer（50 mM Tris，pH8.0，0.5 mM EDTA，1mM DTT）中，30℃反应1h，剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。
纯化（Purification ）：Ni亲和纯化
纯度：≥95%（by SDS-PAGE）

产品组份：
rTEV Protease（5 U/μl）—————200 μl
rTEV Buffer 1（20×）——————2 ml
rTEV Buffer 2（1000×）—————50μl

储存条件：-20℃，有效期一年。