北京现货pUM19-T Vector TA克隆载体批发

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北京现货pUM19-T Vector TA克隆载体批发由老牌试剂供应北京百奥莱博供货并提供技术支持，本产品用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多pUM19-T Vector TA克隆载体等克隆与表达产品请联系我司咨询订购。

名称：北京现货pUM19-T Vector TA克隆载体批发
规格：1μg
产地：国产|进口
编号：SY0295
品牌：百奥莱博
pUM19-T载体是一种用于PCR产物高效克隆（TA Cloning）的专用载体。它是在线性化pUC19载体的基础上，在两侧的3’端添加碱基T而制成。经特殊工艺改造后，使其具有较高的克隆效率：

1）特殊的纯化方式使得超过99% 的pUM19载体两端都具有3’-T突出端，因此极大的降低了载体自连率。
2）由于大部分耐热聚合酶反应时都会在PCR 产物的3’端添加一个A，可与pUM19载体3’ 端的T互补连接，因此可大大提高PCR 产物的连接和克隆效率。
3）pUM19载体多克隆位点位于β-lactamase基因内，可以通过蓝白斑快速筛选含有插入片断的重组子。

产品组份：
pUM19-T Vector (50 ng/μl)————20 μl
500 bp control insert (50 ng/μl)————20 μl

使用说明
1. 将载体置于冰上融化。建议第一次使用时将载体分装成小份保存，每次取一支使用。
2. 按下表配制连接反应体系：

ddH2O	To 10 μl
10×Ligase Buffer	1 μl
pUM19-T Vector (50 ng/μl)	1μl (约0.025 pmol)
插入片段*	0.075 pmol～0.25 pmol
T4 DNA Ligase (400 U/μl)	1 μl

注：插入片段与载体的摩尔比应在3:1～10:1之间。请根据琼脂糖凝胶电泳或紫外分光光度计检测确定插入片段的浓度，并根据其大小计算摩尔量。1 pmol 1 kb双链DNA的质量约为660 ng。
3. 对照反应体系（可选）：

ddH2O	6 μl
10×Ligase Buffer	1 μl
pUM19-T Vector (50 ng/μl)	1 μl (约0.025 pmol)
500 bp control insert(50 ng/μl)	1 μl (约0.15 pmol)
T4 DNA Ligase (400 U/μl)	1 μl

4. 轻轻吹打混匀反应体系，室温22-26℃孵育1-2小时，或16℃过夜。
5. 转化：
1) 将连接产物加入到100 μl感受态细胞中(连接产物的体积不要超过感受态细胞体积的1/6)，轻轻弹匀，冰上孵育30分钟。
2) 将离心管置于42℃水浴，不要晃动，准确热激90s后，立刻置于冰水浴中，不要晃动，静置2-3分钟。
3) 向离心管中加入900 μl LB或SOC培养基，150 rpm, 37℃振荡培养45分钟，使菌体复苏，抗性基因表达。
4) 2500 g离心5分钟，去掉900 μl上清。用剩余培养基将菌体重悬混匀，用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀，室温正置10min。待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。
【注】：如果使用超级感受态细胞（转化效率>108 cfu/μg），可以直接吸取100-200 μl孵育后的菌液涂板。剩余菌液可在4℃保存，一周之内都可重新涂板。

注意事项
1) 尽量避免反复冻融，可将载体和对照片段分装成小份后保存。
2) 连接使用的PCR 片段3’ 端应带有A 末端；Pfu DNA Polymerase (SY0036)等高保真聚合酶的扩增产物不带A，应先在其末端加A后再进行TA克隆。
3) 为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

附1：pUM19-T 载体结构


储存条件：-20℃。

更多有关北京现货pUM19-T Vector TA克隆载体批发的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销售以下产品：

·NTP套装(100 mM each)
编号：SY0056
英文名称：NTP Set (ATP, CTP, UTP, GTP, 100 mM each)
规格：4×1mL
本品为ATP、UTP、GTP和CTP共4种溶液的套装，可用于分子生物学中多种相关应用，如体外转录、RNA扩增，siRNA合成等。还可作为多种酶的反应底物或辅酶。

本品为纯度≥99%的ATP、UTP、GTP和CTP的三钠盐配制所得的无色透明水溶液，pH (25℃)= 7.0±0.1，浓度为100mM，且无DNase和RNase污染。

产品组份：

组分名称	规格	保存
ATP（100mM）	1ml	-20℃保存
UTP（100mM）	1ml	-20℃保存
CTP（100mM）	1ml	-20℃保存
GTP（100mM）	1 ml	-20℃保存

注意事项
1) 可以室温溶解，溶解后需置于冰上，使用完毕后宜立即置于-20℃保存。
2) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。


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·2×Long PCR Master Mix(不含染料)
编号：SY0032
英文名称：2×Long PCR Master Mix (No Dye)
规格：1ml
Long PCR Master Mix (No Dye)包含Long Taq DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，大大简化实验的操作步骤，提高了高通量操作和实验结果的重现性。Long Taq DNA Polymerase是Taq DNA Polymerase与一种含有3"→5’外切酶活性（校对活性）的蛋白组成的混合酶，保真度是Taq DNA Polymerase的6倍。配合独特的缓冲体系，Long Taq DNA Polymerase可从人基因组模板中扩增长达15 kb的片段。

Mix中不含有溴酚蓝染料，其中的保护剂使得Mix 经过反复冻融后仍可保持稳定的活性。PCR产物的3’端带A，可轻松克隆至T载体。

质量控制
核酸外切酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测：50 μl体系中，以100 ng人基因组DNA为模板扩增dystrophin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的15 Kb条带。

操作注意事项
由于Long Taq DNA Polymerase在室温下也有一定的反应活性，建议在冰上配制PCR反应体系，再置于PCR仪上进行扩增。这样有利于提高扩增的特异性，减少非特异扩增，得到良好的PCR结果。

引物设计注意事项
1）引物3’端最后一个碱基最好为G或者C；
2）引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配；
3）引物3’端尽量避免发夹结构出现；
4）引物的Tm值调整至55℃-65℃之间。
5）引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
6）引物的GC含量控制在40%-60%之间；
7）正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。


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·CCK-8试剂盒
编号：SY0469
英文名称：Cell Counting Kit (CCK-8)
规格：100T
CCK法应用非常广泛，如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。

Cell Counting Kit简称CCK试剂盒，是一种基于WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

WST-8属于MTT的升级产品，工作原理为：在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物（formazan） 。颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。

储存条件：4℃，有效期一年。

CCK法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较

检测方法	MTT法	XTT法	WST-1法	CCK法
甲臜产物的水溶性	差（需加有机溶剂溶解后再检测）	好	好	好
产品性状	粉末	2瓶溶液	溶液	1瓶溶液
使用方法	配成溶液后使用	现配现用	即开即用	即开即用
检测灵敏度	高	很高	很高	高
检测时间	较长	较短	较短	最短
检测波长	560-600nm	420-480nm	420-480nm	430-490nm
细胞毒性	高，细胞形态完全消失	很低，细胞形态不变	很低，细胞形态不变	很低，细胞形态不变
试剂稳定性	一般	较差	一般	很好
批量样品检测	可以	非常适合	非常适合	非常适合
便捷程度	一般	便捷	便捷	非常便捷

另外，酚红和血清对CCK法的检测不会造成干扰。

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