玻璃层析空柱选择包B

一文搞定纯化实验 7 大常见问题！

你是不是每次做纯化实验心里都会默念：退！退！退！ 有关纯化实验的所有问题都退！感觉像是在作法而不像是在做实验。 虽然蛋白纯化被认为是考验基本功的实验，但接踵而至的考验只会让原本不熟练的实验雪上加霜，导致纯化实验失败了一次又一次…… 失败原因五花八门，比如：标签蛋白纯不出来，过了分子筛跑 SDS 胶还一堆杂带？面对着样品的精细分离，却不会选层析柱？纯化得到的组分中没有或只有少量目的 His 标签蛋白，知道了蛋白等电点却不知如何选择

WB 实验背景很脏是什么原因？该如何解决？

：   1、实验准备   提取蛋白所需的研磨器材，以及制胶的玻璃板、梳子要清洗干净;   若长期不使用，建议器材在实验前再行清洗一次以杜绝相应的污染。   2、提取蛋白   选择合适的蛋白裂解液，充分去除一些干扰因素，比如核酸，多糖，脂类等;   建议蛋白在测量浓度后变性分装保存，避免反复冻融使蛋白发生降解;   注意 Loading buffer 在保质期内，蛋白加入 Loading buffer 后充分混匀，再煮沸变性。   3、制胶   玻璃板夹紧之后，有些人习惯性加水试一下是否漏胶，建议

Western 实验步骤

静置约 1 h，直至凝胶溶液完全聚合凝固，小心拔出梳子，准备上样。 上样 向电泳槽中加入电泳缓冲液，要求两块玻璃内侧电泳液高于上样孔，外侧电泳槽内电泳液浸没凝胶底部，玻璃板内侧液面高于外侧，根据测得浓度计算的样本上样量点样（已处理好的样品，蛋白预染 Marker），保证每孔总蛋白量在 30-50 μg，确保总上样量体系小于 30 μL，注意上样时间尽量短，避免样品扩散。 电泳 上样后，盖好电泳槽的盖子，注意正负极，并选择适当的电压进行电泳。通常在不连续的系统中，上层浓缩胶的电泳电压(建议