预混合HRP比色底物

ELISA 实验操作要点

本底值增高。OPD 底物液受光照会自行变色，显色反应应避光进行，显色反应结束时加入终止液终止反应。OPD 产物用硫酸终止后，显色由橙黄色转向棕黄色。 TMB 受光照的影响不大，可在室温中置于操作台上，边反应边观察结果。但为保证实验结果的稳定性，宜在规定的适当时间阅读结果。TMB 经 HRP 作用后，约 40 分钟显色达顶峰，随即逐渐减弱，至 2 小时后即可完全消退至无色。TMB 的终止液有多种，叠氮钠和十二烷基硫酸钠（SDS）等酶抑制剂均可使反应终止。这类终止剂尚能使蓝色维持较长时间（12-24

别小瞧了ELISA

室所用洗板机3次洗板即可达到要求。 六、显色 在目前的以HRP作为标记酶的商品ELISA试剂盒中，如以TMB为底物，则提供的底物为A和B两瓶应用液；如以OPD为底物，则试剂盒提供OPD片剂或 粉剂，临用前配制。一般商品试剂盒显色反应条件为37 ℃或室温反应15～30分钟。从理论上说，37 ℃30分钟才可以使HRP的底物催化反应完全，尽管在最初的10分钟内，绝大部份催化反应即可完成。因此，为使弱阳性样本孔能有充分的显色，建议在37 ℃下反应25～30分钟后，终止反应比色

【原创】miRNA Northern Blot实验步骤

放置。 （2）用洗涤缓冲液润洗膜。 （3）加入15ml封闭缓冲液，室温振荡30min。 （4）用1ml封闭缓冲液稀释15μl辣根过氧化物酶标记链霉亲和素（Streptavidin-HRP conjugate），加入显色盒中（不要将酶稀释液直接加在膜上），室温继续振荡45min。 （5）倒掉封闭缓冲液，用洗涤缓冲液洗涤三次，每次室温振荡10min。 （6）等体积的混合Substrate A和B。 （7）将膜放在一个平板上，用1ml底物溶液覆盖整张膜。（为了确保底物溶液在整张膜上分布均匀，可以再滴加了底物