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上海希言科学仪器有限公司
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文献和实验RNA的完整性可以通过琼脂糖变性电泳分析检测,而含量则通过紫外分光光度计确定。常见的变性电泳有甲醛变性电泳,戊二醛变性电泳等。甲醛变性电泳检测RNA完整性一、材料、试剂和仪器1 材料: 植物总RNA 5-10μg2 试剂:1)加样运载缓冲液(Loading buffer),50% 甘油,1mmol/L EDTA (pH 8.0),0.25%溴酚蓝,25%二甲苯氰FF2)10×TAE Buffer3)5×甲醛凝胶电泳缓冲液:,0.1mol/L MOPs (pH7.0),40mmol/L乙酸
交联。 5.6.10 将胶和紫外交联后的膜,在紫外灯下检测转移效率。(避免太长的紫外曝光时间) 5.6.11 将膜在-20℃保存。 5.7 探针的制备 5.7.1 在1.5 ml离心管中配制以下反应液: 模板DNA(25 ng) 1ul Random Primer 2ul 灭菌水 11ul 总体积: 14ul 5.7.2 95°C加热3分钟后,迅速放置于冰冷却5 min。
DNA Marker。1~2 V/cm,DNA 从负极泳向正极。电泳至溴酚蓝指示剂接近凝胶另一端时,停止电泳。取出凝胶,紫外灯下观察电泳效果。在胶的一边放置一把刻度尺,拍摄照片。正常电泳图谱呈现一连续的涂抹带,照片摄入刻度尺是为了以后判断信号带的位置,以确定被杂交的 DNA 长度。四、DNA 从琼脂糖凝胶转移到固相支持物转移就是将琼脂糖凝胶中的 DNA 转移到硝酸纤维膜(NC 膜)或尼龙膜上,形成固相 DNA。转移的目的是使固相 DNA 与液相的探针进行杂交。常用的转移方法有盐桥法、真空法和电转移法
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