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上海希言科学仪器有限公司
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文献和实验实验目的 掌握细胞计数的方法。 了解区分细胞存活状态的方法。 实验用品 0.4%台盼蓝溶液、无水乙醇或95%乙醇溶液、脱脂棉 普通显微镜、试管、吸管、毛细吸管、细胞计数板、绸布。 实验原理 在细胞培养工作中,常需要了解细胞生活状态和鉴别细胞死活,确定细胞接种浓度和数量以及了解细胞存活率和增殖度,如用酶消化制备的细胞悬液中细胞活力的鉴别,冻存细胞复苏后的活力检测等。细胞悬液制备后,常用活体染料台盼蓝对细胞进行染色,进行细胞计数。台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞
细胞培养技术中,细胞计数是一项基本功,对于标准化培养条件以及需要精确定量的实验来说都非常关键。这里介绍使用血细胞计数器对细胞进行计数的经典方法以及中间一些需要注意的细节。制备细胞悬液:对于贴壁生长的细胞,我们需要首先使用胰酶消化的方法使细胞从培养皿表面脱落根据需要加入合适体积的培养基,将细胞进行中和及稀释,以得到均质的细胞悬液。要求尽可能将细胞吹打散开,不要残留任何细胞团准备血细胞计数器:使用70%乙醇将盖玻片和血细胞计数器清洁干净将将盖玻片润湿(使用水或呼一口气,目的是使盖玻片与血细胞计数
血细胞计数器(也被拼写血球计数仪)是一种蚀刻玻璃室提出双方将举行石英盖玻片完全室地板0.1毫米以上。为9毫米2的总表面积的计数室中进行蚀刻。 图1、 血细胞计数器的尺寸。 浓度的计算是根据上下方的盖玻片的体积。一个大广场(参见图2中的W)拥有量为0.0001毫升(长x宽x高,也就是说,0.1厘米×0.1厘米×0.01厘米)。 在这两种方法中,通过毛细管作用填充血细胞计数器 - 放置填充的吸移管具有良好的悬吊在血细胞计数器的边缘的凹口的细胞混合,然后慢慢地排出
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